| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 英文缩略表 | 第7-12页 |
| 1 前言 | 第12-29页 |
| 1.1 体外培养细胞的生长与增殖特征 | 第12-16页 |
| 1.1.1 形态学特征 | 第12页 |
| 1.1.2 体外培养的细胞生长过程 | 第12-16页 |
| 1.2 体内外细胞分化特点 | 第16-18页 |
| 1.2.1 体内外细胞的差异 | 第16-17页 |
| 1.2.2 培养细胞分化状态的变化 | 第17-18页 |
| 1.3 影响动物细胞体外生长的因素 | 第18页 |
| 1.4 动物组织细胞原代培养技术 | 第18-27页 |
| 1.4.1 外植法 | 第18-19页 |
| 1.4.2 酶消化法 | 第19-20页 |
| 1.4.3 上皮组织的细胞培养 | 第20-22页 |
| 1.4.4 结缔组织的体外培养 | 第22-27页 |
| 1.5 细胞源疫苗研究情况概述 | 第27-28页 |
| 1.6 小鼠脾细胞研究概况与本论文研究目的和意义 | 第28-29页 |
| 2 小鼠贴壁型脾细胞分离及传代培养方法的建立 | 第29-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第29-30页 |
| 2.1.1 实验用细胞 | 第29页 |
| 2.1.2 实验试剂及耗材 | 第29-30页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-40页 |
| 2.2.1 无菌获取小鼠脾脏的方法 | 第30页 |
| 2.2.2 小鼠脾细胞的分离与纯化方法 | 第30页 |
| 2.2.3 小鼠脾细胞的原代培养方法 | 第30-31页 |
| 2.2.4 小鼠脾细胞的传代培养方法 | 第31页 |
| 2.2.5 不同代次小鼠贴壁型脾细胞的生长速度研究方法 | 第31-34页 |
| 2.2.6 不同代次小鼠脾细胞的形态观察方法 | 第34-35页 |
| 2.2.7 不同代次小鼠脾细胞的代谢特征研究方法 | 第35-40页 |
| 3 小鼠贴壁型脾细胞分泌细胞因子的分泌特征的研究 | 第40-48页 |
| 3.1 前言 | 第40-41页 |
| 3.2 实验材料 | 第41-42页 |
| 3.2.1 实验用细胞 | 第41页 |
| 3.2.2 实验试剂与耗材 | 第41-42页 |
| 3.2.3 实验仪器 | 第42页 |
| 3.3 实验方法 | 第42-48页 |
| 3.3.1 小鼠F10代贴壁型脾细胞总RNA的提取方法 | 第42-44页 |
| 3.3.2 小鼠脾细胞总RNA的反转录方法 | 第44页 |
| 3.3.3 总RNA提取效果的检测方法 | 第44-45页 |
| 3.3.4 小鼠脾细胞分泌的细胞因子mRNA水平和蛋白质水平分析方法 | 第45-47页 |
| 3.3.5 不同代次小鼠脾细胞分泌细胞因子蛋白质水平的分析 | 第47-48页 |
| 4 小鼠脾细胞的应用 | 第48-51页 |
| 4.1 前言 | 第48-49页 |
| 4.2 实验材料 | 第49页 |
| 4.2.1 细胞与病毒 | 第49页 |
| 4.2.2 试剂与耗材 | 第49页 |
| 4.2.3 仪器 | 第49页 |
| 4.3 实验方法与步骤 | 第49-51页 |
| 4.3.1 F1、F2、F10、F20和F30脾细胞培养液对PRRSV和PRV繁殖的影响 | 第49-50页 |
| 4.3.2 PRRSV和PRV在F30、F40和F50代脾细胞中繁殖的特征 | 第50-51页 |
| 5 实验结果 | 第51-70页 |
| 5.1 小鼠贴壁型脾细胞的生长特性 | 第51-60页 |
| 5.1.1 不同代次小鼠贴壁型脾细胞生长情况 | 第51-52页 |
| 5.1.2 不同代次及不同观察时间的小鼠贴壁型脾细胞形态变化 | 第52-60页 |
| 5.2 不同代次小鼠贴壁型脾细胞的代谢特征 | 第60-63页 |
| 5.3 小鼠F10代贴壁型脾细胞细胞因子的分泌情况 | 第63-68页 |
| 5.3.1 小鼠F10代贴壁型脾细胞总RNA的电泳结果 | 第63-64页 |
| 5.3.2 细胞因子mRNA表达水平反转录产物的PCR检测结果 | 第64-67页 |
| 5.3.3 不同代次小鼠脾细胞的细胞因子蛋白质表达水平 | 第67-68页 |
| 5.4 小鼠脾细胞的应用结果 | 第68-70页 |
| 5.4.1 F1、F2、F10、F20、F30代小鼠脾细胞培养液上清对PRRSV和PRV繁殖的影响 | 第68-69页 |
| 5.4.2 F30、F40和F50代小鼠脾细胞繁殖PRRSV和PRV病毒的结果 | 第69-70页 |
| 6 实验结果分析与讨论 | 第70-72页 |
| 7 结论 | 第72-74页 |
| 致谢 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-82页 |
| 附录 细胞因子特异性PCR产物的测序结果 | 第82-83页 |
