| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 引言 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-19页 |
| 1 鱼类orexin的研究进展 | 第13-17页 |
| 1.1 orexin基因结构特点 | 第13-14页 |
| 1.2 orexin及其mRNA的分布 | 第14-15页 |
| 1.3 orexin的受体及其分布 | 第15页 |
| 1.4 orexin的生理功能 | 第15-17页 |
| 2 orexin的应用 | 第17-19页 |
| 第二章 半滑舌鳎（Cynoglossus semilaevis）消化道显微与超微结构研究 | 第19-31页 |
| 1 材料和方法 | 第19-20页 |
| 1.1 实验鱼来源 | 第19页 |
| 1.2 组织学观察 | 第19-20页 |
| 1.3 电镜观察 | 第20页 |
| 1.4 数据统计分析 | 第20页 |
| 2 结果 | 第20-28页 |
| 2.1 消化道形态特征 | 第21页 |
| 2.2 消化道组织学特征 | 第21-23页 |
| 2.3 食道胃和肠道超微结构 | 第23页 |
| 2.4 消化道黏液细胞数量分布特点 | 第23-28页 |
| 3 讨论 | 第28-31页 |
| 第三章 半滑舌鳎orexin基因的克隆、组织分布和早期生长发育表达特性 | 第31-43页 |
| 1 材料与方法 | 第31-35页 |
| 1.1 实验用鱼及样品处理 | 第31-33页 |
| 1.2 总RNA提取 | 第33页 |
| 1.3 cDNA第一链合成 | 第33页 |
| 1.4 5’端和 3’端cDNA序列克隆 | 第33-34页 |
| 1.5 序列分析 | 第34页 |
| 1.6 qPCR检测orexin mRNA的相对表达量 | 第34-35页 |
| 2 结果 | 第35-41页 |
| 2.1 半滑舌鳎orexin cDNA全长序列 | 第35-36页 |
| 2.2 半滑舌鳎orexin氨基酸序列相似性分析 | 第36-38页 |
| 2.3 半滑舌鳎orexin系统进化分析 | 第38-39页 |
| 2.4 半滑舌鳎orexin mRNA组织表达特性分析 | 第39页 |
| 2.5 半滑舌鳎orexin mRNA胚胎发育中表达特性分析 | 第39-40页 |
| 2.6 1-180 日龄半滑舌鳎orexin mRNA表达特性分析 | 第40-41页 |
| 3 讨论 | 第41-43页 |
| 3.1 半滑舌鳎orexin的基因序列特征及同源性分析 | 第41页 |
| 3.2 半滑舌鳎orexin的基因在不同组织和早期生长发育表达特性 | 第41-43页 |
| 第四章 半滑舌鳎orexin A和orexin B体外重组表达及活性分析 | 第43-61页 |
| 1 材料与方法 | 第43-46页 |
| 1.1 实验用鱼 | 第43页 |
| 1.2 orexin A成熟肽的克隆 | 第43页 |
| 1.3 重组质粒的构建 | 第43-44页 |
| 1.4 重组质粒在表达菌株中的表达 | 第44页 |
| 1.5 重组蛋白的Western-blotting验证 | 第44页 |
| 1.6 重组蛋白的纯化和复性 | 第44页 |
| 1.7 orexin A重组蛋白生物活性检测 | 第44-46页 |
| 1.8 数据分析 | 第46页 |
| 2 结果 | 第46-58页 |
| 2.1 表达载体构建 | 第46-48页 |
| 2.2 重组质粒在大肠杆菌中的表达 | 第48-52页 |
| 2.3 重组蛋白的western-blotting验证 | 第52-53页 |
| 2.4 重组蛋白的纯化 | 第53-55页 |
| 2.5 重组蛋白的生物活性检测 | 第55-58页 |
| 3 讨论 | 第58-61页 |
| 3.1 orexin成熟肽体外重组表达 | 第58页 |
| 3.2 重组蛋白活性检测 | 第58-61页 |
| 结论 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
