| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 引言 | 第14-22页 |
| 1.1 金黄色葡萄球菌 | 第14-16页 |
| 1.1.1 金黄色葡萄球菌的生物学特性 | 第14-15页 |
| 1.1.2 金黄色葡萄球菌的毒力因子 | 第15-16页 |
| 1.2 奶牛乳腺的免疫防御 | 第16-17页 |
| 1.2.1 非特异性免疫应答 | 第17页 |
| 1.2.2 适应性免疫应答 | 第17页 |
| 1.3 金黄色葡萄球菌疫苗研究进展 | 第17-18页 |
| 1.3.1 全菌灭活疫苗 | 第17页 |
| 1.3.2 亚单位疫苗 | 第17-18页 |
| 1.3.3 核酸疫苗 | 第18页 |
| 1.3.4 抗原-抗体复合物疫苗 | 第18页 |
| 1.4 FeRn研究进展 | 第18-20页 |
| 1.5 免疫佐剂的选择 | 第20-21页 |
| 1.6 本研究的目的及意义 | 第21-22页 |
| 2 研究一 Fc-FnBPB-ClfA的基因串联 | 第22-35页 |
| 2.1 试验材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1 质粒及菌株 | 第22页 |
| 2.1.2 载体与试剂 | 第22页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第22页 |
| 2.1.4 主要溶液 | 第22-23页 |
| 2.2 试验方法 | 第23-30页 |
| 2.2.1 试验流程图 | 第23-24页 |
| 2.2.2 大鼠的总RNA的提取 | 第24页 |
| 2.2.3 反转录 | 第24-26页 |
| 2.2.4 大鼠IgG的Fc基因片段的回收及纯化 | 第26-27页 |
| 2.2.5 重组质粒pMD19T-Fc的构建 | 第27页 |
| 2.2.6 重组质粒pMD19T-Fc的PCR鉴定 | 第27-28页 |
| 2.2.7 重组质粒pMD19T-Fc的提取 | 第28-29页 |
| 2.2.8 重组质粒pMD19T-Fc的序列测定 | 第29页 |
| 2.2.9 Fc基因与FnBPB-ClfA基因的串联 | 第29-30页 |
| 2.2.10 重组质粒pMD19T-Fc-FnBPB-ClfA的构建 | 第30页 |
| 2.2.11 重组质粒pMD19T-Fc-FnBPB-ClfA的PCR鉴定 | 第30页 |
| 2.2.12 重组质粒pMD19T-Fc-FnBPB-ClfA的提取 | 第30页 |
| 2.2.13 重组质粒pMD19T-Fc-FnBPB-ClfA序列测定 | 第30页 |
| 2.3 结果 | 第30-33页 |
| 2.3.1 大鼠总RNA完整性鉴定 | 第30-31页 |
| 2.3.2 IgG Fc基因片段的RT-PCR扩增结果 | 第31页 |
| 2.3.3 重组质粒pMD19T-Fc序列的测定结果及分析 | 第31-32页 |
| 2.3.4 Fc-FnBPB-ClfA串联基因的PCR扩增结果 | 第32-33页 |
| 2.4 讨论 | 第33-34页 |
| 2.5 小结 | 第34-35页 |
| 3 研究二 融合蛋白Fc-FnBPB-ClfA的原核表达及偶联物CP8+Fc-FnBPB-ClfA的制备 | 第35-56页 |
| 3.1 试验材料 | 第35-37页 |
| 3.1.1 表达载体 | 第35页 |
| 3.1.2 试剂 | 第35-36页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第36页 |
| 3.1.4 主要溶液的配制 | 第36-37页 |
| 3.2 试验方法 | 第37-45页 |
| 3.2.1 试验流程图 | 第37-38页 |
| 3.2.2 重组表达质粒pET32a-Fc-FnBPB-ClfA的构建 | 第38-40页 |
| 3.2.3 重组蛋白Fc-FnBPB-ClfA的诱导表达及表达产物分析 | 第40-45页 |
| 3.2.4 CP8+Fc-FnBPB-ClfA偶联物的制备 | 第45页 |
| 3.3 结果 | 第45-54页 |
| 3.3.1 重组表达质粒pET32a-Fc-FnBPB-ClfA的双酶切鉴定 | 第45-46页 |
| 3.3.2 重组表达质粒pET32a-Fc-FnBPB-ClfA序列的测定结果及分析 | 第46-49页 |
| 3.3.3 IPTG诱导剂最佳浓度的确定 | 第49-50页 |
| 3.3.4 重组蛋白的可溶性鉴定 | 第50-51页 |
| 3.3.5 重组目的蛋白的纯化 | 第51-52页 |
| 3.3.6 Western blot分析结果 | 第52-53页 |
| 3.3.7 CP8+Fc-FnBPB-ClfA偶联物定性分析结果 | 第53-54页 |
| 3.4 讨论 | 第54-55页 |
| 3.4.1 表达系统的选择 | 第54页 |
| 3.4.2 重组表达质粒pET32a-Fc-FnBPB-ClfA的构建 | 第54-55页 |
| 3.4.3 荚膜多糖与蛋白的偶联 | 第55页 |
| 3.5 小结 | 第55-56页 |
| 4 研究三 融合蛋白Fc-FnBPB-ClfA、偶联物CP8+Fc-FnBPB-ClfA及抗原-抗体复合物疫苗的免疫效果比较 | 第56-95页 |
| 4.1 试验材料 | 第56页 |
| 4.1.1 试验动物 | 第56页 |
| 4.1.2 重组蛋白与试剂 | 第56页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第56页 |
| 4.2 试验方法 | 第56-67页 |
| 4.2.1 试验流程图 | 第56-57页 |
| 4.2.2 融合蛋白Fc-FnBPB-ClfA浓度及偶联物中CP8含量测定 | 第57-58页 |
| 4.2.3 免疫动物、免疫程序及分组情况 | 第58-60页 |
| 4.2.4 免疫血清和乳清特异性抗体动态检测 | 第60-61页 |
| 4.2.5 偶联物免疫组中荚膜多糖和蛋白的特异性抗体检测 | 第61页 |
| 4.2.6 免疫血清和乳清中IgG型(IgG1/IgG2a)的测定 | 第61页 |
| 4.2.7 T淋巴细胞增殖试验 | 第61-62页 |
| 4.2.8 免疫大鼠全血的吞噬调理试验 | 第62页 |
| 4.2.9 Th1/Th2类细胞因子水平的检测 | 第62页 |
| 4.2.10 大鼠乳腺组织免疫组化试验 | 第62-63页 |
| 4.2.11 大鼠乳腺攻毒保护试验 | 第63-64页 |
| 4.2.12 大鼠乳腺组织病理组织切片 | 第64-67页 |
| 4.3 结果 | 第67-89页 |
| 4.3.1 重组蛋白浓度测定结果 | 第67页 |
| 4.3.2 偶联物CP8+Fc-FnBPPB-ClfA中CP8含量的测定 | 第67-68页 |
| 4.3.3 免疫血清IgG抗体水平动态检测结果 | 第68页 |
| 4.3.4 血清和乳清抗体效价检测结果 | 第68-72页 |
| 4.3.5 偶联物血清特异性抗体检测结果 | 第72-74页 |
| 4.3.6 免疫大鼠血清和乳清中IgG1/IgG2a测定结果 | 第74-77页 |
| 4.3.7 T淋巴细胞增殖试验结果 | 第77-78页 |
| 4.3.8 吞噬调理试验结果 | 第78-79页 |
| 4.3.9 Th1/Th2类细胞因子检测结果 | 第79-80页 |
| 4.3.10 大鼠乳腺组织免疫组化试验 | 第80-83页 |
| 4.3.11 大鼠的乳头管攻毒保护试验 | 第83-87页 |
| 4.3.12 大鼠乳腺组织病理切片结果 | 第87-89页 |
| 4.4 讨论 | 第89-93页 |
| 4.4.1 金黄色葡萄球菌毒力因子的筛选与Fc的作用 | 第89-90页 |
| 4.4.2 乳房炎模型的选择 | 第90页 |
| 4.4.3 抗体效价的分析 | 第90-91页 |
| 4.4.4 淋巴细胞增殖 | 第91页 |
| 4.4.5 吞噬调理试验 | 第91-92页 |
| 4.4.6 细胞因子测定和IgG亚型的测定 | 第92页 |
| 4.4.7 最佳免疫佐剂的选择 | 第92-93页 |
| 4.5 结论 | 第93-95页 |
| 5 整体讨论 | 第95-96页 |
| 6 整体结论 | 第96-97页 |
| 致谢 | 第97-98页 |
| 参考文献 | 第98-107页 |
| 作者简介 | 第107页 |
