| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 1 引言 | 第7-14页 |
| 1.1 胶质瘤基因治疗的现状 | 第7-8页 |
| 1.2 TK对胶质瘤治疗的现状 | 第8-10页 |
| 1.3 血脑屏障是基因治疗的一个难点 | 第10-11页 |
| 1.4 纳米材料作为基因载体的优势 | 第11-12页 |
| 1.5 脑胶质原位瘤动物模型 | 第12页 |
| 1.6 本文研究的目的和意义 | 第12-14页 |
| 2 材料和方法 | 第14-20页 |
| 2.1 细胞系、菌种、质粒、纳米载体 | 第14页 |
| 2.2 主要试剂和抗体 | 第14页 |
| 2.3 主要仪器 | 第14页 |
| 2.4 细胞培养 | 第14-15页 |
| 2.5 构建p3xflag-cmv10TK表达载体 | 第15-16页 |
| 2.5.1 引物序列设计 | 第15页 |
| 2.5.2 PCR的反应条件 | 第15页 |
| 2.5.3 构建p3xflag-cmv10TK克隆 | 第15-16页 |
| 2.6 质粒的大量制备 | 第16页 |
| 2.7 慢病毒包装和侵染 | 第16-17页 |
| 2.7.1 慢病毒的包装 | 第16-17页 |
| 2.7.2 慢病毒的侵染 | 第17页 |
| 2.8 细胞的转染 | 第17页 |
| 2.9 Western Blot | 第17-18页 |
| 2.9.1 蛋白裂解液的制备 | 第17页 |
| 2.9.2 细胞蛋白的提取 | 第17页 |
| 2.9.3 免疫印迹 | 第17-18页 |
| 2.10 体外血脑屏障模型的构建 | 第18页 |
| 2.10.1 体外血脑屏障的构建 | 第18页 |
| 2.10.2 体外血脑屏障模型的验证 | 第18页 |
| 2.11 MTT实验 | 第18页 |
| 2.12 建立脑胶质原位瘤动物模型 | 第18-19页 |
| 2.12.1 U87MG-Luc细胞的构建 | 第18页 |
| 2.12.2 U87MG-Luc裸鼠皮下模型 | 第18-19页 |
| 2.12.3 U87MG-Luc裸鼠脑原位瘤模型 | 第19页 |
| 2.13 免疫组化染色 | 第19-20页 |
| 3 结果与分析 | 第20-28页 |
| 3.1 TK慢病毒的包装、侵染以及表达 | 第20页 |
| 3.2 GCV/TK抑制HEK293T细胞的增殖 | 第20-21页 |
| 3.3 胶质瘤细胞对GCV/TK呈现更好的敏感性 | 第21-22页 |
| 3.4 GCV/TK在胶质瘤细胞中存在旁观者效应 | 第22-23页 |
| 3.5 慢病毒介导TK在胶质瘤内表达 | 第23页 |
| 3.6 PEI-PEG介导TK有效的表达，结合GCV能抑制胶质瘤细胞的增殖 | 第23-24页 |
| 3.7 体外血脑屏障模型的构建 | 第24-25页 |
| 3.8 PEI-PEG-Angiopep介导TK在胶质瘤细胞的表达 | 第25-26页 |
| 3.9 GFAP特异性启动子介导TK组织特异性表达 | 第26-27页 |
| 3.10 脑胶质原位瘤动物模型的构建 | 第27-28页 |
| 4 讨论 | 第28-30页 |
| 5 结论 | 第30-31页 |
| 参考文献 | 第31-37页 |
| 致谢 | 第37页 |
