圆鼻巨晰微卫星分子标记的制备和遗传多样性的RAPD分析
| 中文摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-9页 |
| 第一部分 前言 | 第9-17页 |
| 一、国内外巨蜥的研究现状 | 第9-11页 |
| 1、巨蜥的形态、生理、繁殖和分类等方面的研究 | 第9-10页 |
| 2、巨蜥分子生物学方面的研究 | 第10页 |
| 3、圆鼻巨蜥的研究现状 | 第10-11页 |
| 二、DNA分子标记及在物种遗传多样性研究中的应用 | 第11-15页 |
| 1、微卫星分子标记 | 第12-15页 |
| ·微卫星的获得方法 | 第13-14页 |
| ·微卫星分子标记在遗传多样研究中的应用 | 第14-15页 |
| 2、RAPD标记 | 第15页 |
| ·RAPD技术在遗传多样性研究中的应用 | 第15页 |
| 三、濒危物种的保护遗传学研究 | 第15-16页 |
| 四、本研究目的和意义 | 第16-17页 |
| 第二部分 研究论文部分 | 第17-51页 |
| 第一章 磁珠富集法制备圆鼻巨蜥的微卫星分子标记 | 第17-42页 |
| 一、材料 | 第17-18页 |
| 1、样品 | 第17页 |
| 2、主要试剂 | 第17页 |
| 3、限制性内切酶和引物序列 | 第17-18页 |
| ·所用的限制性内切酶的识别位点 | 第17-18页 |
| ·人工寡聚核苷酸接头序列 | 第18页 |
| 4 、主要仪器设备 | 第18页 |
| 二、方法 | 第18-29页 |
| 1 、样品基因组DNA的提取与电泳检测 | 第18-20页 |
| ·样品DNA的提取 | 第18-19页 |
| ·样品DNA电泳检测 | 第19-20页 |
| 2、含微卫星DNA片段的筛选 | 第20-27页 |
| ·基因组DNA的酶切与相关片段回收 | 第20-21页 |
| ·目的片段连接接头及PCR扩增 | 第21-22页 |
| ·微卫星的富集 | 第22-25页 |
| ·PCR扩增捕获的DNA | 第25-26页 |
| ·载体的连接 | 第26页 |
| ·转化 | 第26-27页 |
| ·阳性克隆的筛选与鉴定 | 第27页 |
| ·测序 | 第27页 |
| 3、PCR引物的设计与筛选 | 第27-28页 |
| ·引物的设计 | 第27-28页 |
| ·引物的筛选 | 第28页 |
| 4、聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第28-29页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶的制备 | 第28页 |
| ·PCR产物的上样电泳 | 第28-29页 |
| ·银染和显影 | 第29页 |
| 5、微卫星数据的采集、整理和校正 | 第29页 |
| 6、微卫星数据的处理和分析 | 第29页 |
| 三、结果与分析 | 第29-38页 |
| 1、微卫星位点筛选结果 | 第29-33页 |
| ·圆鼻巨蜥DNA的电泳检测结果 | 第29-30页 |
| ·DNA的酶切和纯化回收 | 第30页 |
| ·连接接头后的PCR扩增和纯化回收 | 第30-31页 |
| ·磁珠富集后的PCR扩增 | 第31-32页 |
| ·菌落PCR的扩增 | 第32-33页 |
| 2、阳性克隆的测序 | 第33页 |
| 3、引物的设计与筛选 | 第33页 |
| 4、微卫星引物的检测 | 第33-35页 |
| 5、微卫星位点的数据分析 | 第35-38页 |
| ·基因型分析 | 第35-36页 |
| ·16个微卫星位点的相关信息 | 第36-38页 |
| ·圆鼻巨蜥群体杂和度及等位基因数统计 | 第38页 |
| ·Hardy-weinberg平衡与连锁不平衡 | 第38页 |
| 四、讨论 | 第38-42页 |
| 1、富集法的优越性表现 | 第38-39页 |
| 2、微卫星DNA检测中的"鬼影带" | 第39页 |
| 3、测序所得序列分析 | 第39-40页 |
| 4、实验过程对结果的影响 | 第40页 |
| 5、微卫星分子标记在圆鼻巨蜥研究中的展望 | 第40-42页 |
| 第二章 圆鼻巨蜥遗传多样性的RAPD分析 | 第42-51页 |
| 一、材料 | 第42-43页 |
| 1、样品 | 第42页 |
| 2、主要试剂 | 第42页 |
| 3、主要仪器设备 | 第42-43页 |
| 二、方法 | 第43-45页 |
| 1、随机引物的设计 | 第43页 |
| 2、样品DNA的提取 | 第43页 |
| 3、样品DNA电泳检测 | 第43-44页 |
| 4、RAPD扩增 | 第44页 |
| 5、统计分析与数据处理 | 第44-45页 |
| 三、结果与分析 | 第45-49页 |
| 1、RAPD扩增结果 | 第45-46页 |
| 2、遗传多样性 | 第46页 |
| 3、遗传距离 | 第46-49页 |
| 4、聚类分析图 | 第49页 |
| 三、讨论 | 第49-51页 |
| 1、RAPD技术的局限性 | 第50页 |
| 2、圆鼻巨蜥的保护策略分析 | 第50-51页 |
| 本研究的主要成果及创新点 | 第51-52页 |
| 1、本研究的主要成果 | 第51页 |
| 2、本研究的主要创新点 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-56页 |
| 附录 | 第56-59页 |
| 在校期间发表论文及科研成果 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
