符号说明 | 第4-8页 |
中文摘要 | 第8-10页 |
Abstract | 第10-11页 |
1 前言 | 第12-31页 |
1.1 植物半胱氨酸蛋白酶抑制剂简介 | 第12-24页 |
1.1.1 植物半胱氨酸蛋白酶抑制剂的结构、功能和进化 | 第12-18页 |
1.1.1.1 动物和植物中的半胱氨酸蛋白酶抑制剂保守抑制机制 | 第13-15页 |
1.1.1.2 植物半胱氨酸蛋白酶抑制剂独特的进化途径 | 第15-18页 |
1.1.2 植物半胱氨酸蛋白酶抑制剂的生物学功能 | 第18-22页 |
1.1.2.1 植物半胱氨酸蛋白酶抑制剂在植物体内的作用 | 第18-19页 |
1.1.2.2 植物半胱氨酸蛋白酶抑制剂在储存器官中调控蛋白的更新 | 第19-21页 |
1.1.2.3 植物半胱氨酸蛋白酶抑制剂在植物中的其它作用 | 第21-22页 |
1.1.3 植物半胱氨酸蛋白酶抑制剂在植物体外的作用 | 第22-24页 |
1.2 盐胁迫 | 第24-28页 |
1.2.1 盐胁迫带来的损害 | 第25-26页 |
1.2.2 耐盐的分子机制 | 第26-28页 |
1.3 ABA与种子萌发 | 第28-31页 |
1.3.1 ABA简介 | 第28页 |
1.3.2 种子萌发 | 第28-29页 |
1.3.3 ABA对种子萌发的影响 | 第29-31页 |
2 材料与方法 | 第31-44页 |
2.1 实验材料 | 第31-32页 |
2.1.1 植物材料 | 第31页 |
2.1.2 菌株和质粒 | 第31页 |
2.1.3 酶及生化试剂 | 第31页 |
2.1.4 引物 | 第31-32页 |
2.2 实验方法 | 第32-44页 |
2.2.1 CTAB法提取拟南芥基因组DNA | 第32页 |
2.2.2 植物基因组的纯化 | 第32-33页 |
2.2.3 RNA的提取 | 第33-34页 |
2.2.3.1 利用TRIZOL法提取RNA | 第33页 |
2.2.3.2 RNA中基因组DNA的去除 | 第33页 |
2.2.3.3 RNA反转录 | 第33-34页 |
2.2.4 DNA片段的扩增与载体的构建 | 第34-35页 |
2.2.4.1 DNA片段的扩增 | 第34页 |
2.2.4.2 平末端片段加A | 第34页 |
2.2.4.3 连接反应 | 第34-35页 |
2.2.4.4 酶切反应 | 第35页 |
2.2.5 半定量RT-PCR | 第35-36页 |
2.2.6 大肠杆菌DH5α 感受态的制备及转化 | 第36页 |
2.2.6.1 大肠杆菌DH5α 感受态的制备 | 第36页 |
2.2.6.2 大肠杆菌细胞的转化 | 第36页 |
2.2.7 农杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第36-37页 |
2.2.7.1 根癌农杆菌GV3101感受态细胞的制备 | 第36-37页 |
2.2.7.2 农杆菌的转化 | 第37页 |
2.2.8 小量碱法提取大肠杆菌中的质粒 | 第37页 |
2.2.9 拟南芥转化及转基因鉴定 | 第37-38页 |
2.2.9.1 拟南芥的转化 | 第37-38页 |
2.2.9.2 转基因拟南芥的鉴定 | 第38页 |
2.2.10 原核蛋白诱导 | 第38-39页 |
2.2.11 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第39-40页 |
2.2.11.1 配制试剂 | 第39页 |
2.2.11.2 蛋白质凝胶电泳 | 第39-40页 |
2.2.12 蛋白纯化 | 第40-41页 |
2.2.13 测定木瓜蛋白酶活性 | 第41-42页 |
2.2.14 用Clustal比对蛋白序列 | 第42页 |
2.2.15 用Mega4构建进化树 | 第42页 |
2.2.16 网络资源 | 第42-44页 |
3 结果与分析 | 第44-54页 |
3.1 拟南芥中半胱氨酸蛋白酶抑制剂超家族相关基因结构分析 | 第44-45页 |
3.2 半胱氨酸蛋白酶抑制剂超家族相关基因染色体定位分析 | 第45-46页 |
3.3 半胱氨酸蛋白酶抑制剂超家族相关基因启动子分析 | 第46-47页 |
3.4 半胱氨酸蛋白酶抑制剂超家族相关基因同源性分析 | 第47-48页 |
3.5 半胱氨酸蛋白酶抑制剂超家族蛋白质保守性分析 | 第48-49页 |
3.6 半胱氨酸蛋白酶抑制剂相关基因SRAC1克隆及超表达拟南芥的构建 | 第49-50页 |
3.7 SRAC1超表达拟南芥在萌发期对ABA不敏感 | 第50-51页 |
3.8 SRAC1超表达拟南芥在幼苗期对盐不敏感 | 第51-52页 |
3.9 SRAC1能够抑制半胱氨酸蛋白酶的活性 | 第52-54页 |
4 讨论 | 第54-56页 |
5 结论 | 第56-57页 |
参考文献 | 第57-67页 |
致谢 | 第67页 |