| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1.前言 | 第12-23页 |
| 1.1 家禽卵泡发育及卵泡结构 | 第12-20页 |
| 1.1.1 卵泡发育及卵泡选择 | 第12-13页 |
| 1.1.2 卵泡选择前后激素调节变化 | 第13-14页 |
| 1.1.3 卵泡选择前后卵泡细胞功能变化 | 第14-15页 |
| 1.1.4 卵泡发育不同时期特异性表达的基因 | 第15-20页 |
| 1.2 PTHLH及其受体PTH1R在卵泡发育中的功能 | 第20-21页 |
| 1.2.1 PTHLH的结构和功能 | 第20-21页 |
| 1.2.2 PTH1R的结构和功能 | 第21页 |
| 1.3 本研究的目的和意义 | 第21-23页 |
| 2.材料和方法 | 第23-42页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-26页 |
| 2.1.1 实验动物与样品采集 | 第23页 |
| 2.1.2 主要仪器及厂商 | 第23-24页 |
| 2.1.3 主要试剂及来源 | 第24-25页 |
| 2.1.4 常用试剂的配制 | 第25-26页 |
| 2.1.5 主要生物学应用网站及软件 | 第26页 |
| 2.2 试验方法 | 第26-41页 |
| 2.2.1 5′-及 3′-RACE | 第26-29页 |
| 2.2.2 鸡卵泡颗粒细胞和膜细胞的分离培养 | 第29-30页 |
| 2.2.3 实时荧光定量PCR | 第30-31页 |
| 2.2.4 Western blot | 第31-33页 |
| 2.2.5 免疫组化 | 第33-34页 |
| 2.2.6 过表达及RNA干扰试验 | 第34-37页 |
| 2.2.7 孕酮放射免疫测定 | 第37页 |
| 2.2.8 MTT细胞增殖检测试验 | 第37页 |
| 2.2.9 启动子删除试验及双荧光素酶活性检测 | 第37-38页 |
| 2.2.10 PTHLH基因关键启动子区SNPs位点鉴定及群体多态性分析 | 第38-40页 |
| 2.2.11 SNP位点处转录因子结合位点鉴定 | 第40-41页 |
| 2.3 数据分析 | 第41-42页 |
| 3.结果与分析 | 第42-57页 |
| 3.1 PTHLH基因在鸡卵泡中的转录本分析 | 第42-43页 |
| 3.1.1 总RNA提取 | 第42页 |
| 3.1.2 巢式PCR结果 | 第42-43页 |
| 3.2 PTHLH及其受体PTH1R在鸡卵巢卵泡中的表达 | 第43-45页 |
| 3.2.1 PTHLH与PTH1R在各级卵泡中的表达 | 第43页 |
| 3.2.2 PTHLH与PTH1R在卵泡颗粒细胞、膜细胞中的表达 | 第43-44页 |
| 3.2.3 PTHLH及PTH1R在各级卵泡中蛋白的免疫定位 | 第44-45页 |
| 3.3 PTHLH在鸡卵泡发育中的调控作用 | 第45-47页 |
| 3.3.1 PTHLH对鸡卵泡颗粒细胞、膜细胞增殖的作用 | 第45-46页 |
| 3.3.2 PTHLH对等级前卵泡颗粒细胞类固醇激素合成的作用 | 第46页 |
| 3.3.3 PTHLH对等级前卵泡膜细胞类固醇激素合成的作用 | 第46-47页 |
| 3.4 FSH处理对PTHLH及其受体PTH1R的表达调控 | 第47-48页 |
| 3.5 PTHLH启动子区活性分析 | 第48-53页 |
| 3.5.1 构建启动子删除片段 | 第48-49页 |
| 3.5.2 PTHLH关键启动子区鉴定 | 第49-50页 |
| 3.5.3 PTHLH启动子关键调控区多态性分析 | 第50-51页 |
| 3.5.4 PTHLH启动子区SNPs在不同鸡种中的等位基因和基因型频率 | 第51-52页 |
| 3.5.5 PTHLH启动子区两个SNP位点的连锁不平衡分析 | 第52页 |
| 3.5.6 PTHLH启动子区SNPs位点单倍型分析 | 第52-53页 |
| 3.6 PTHLH启动子区SNPs位点与产蛋性能的关联分析 | 第53-54页 |
| 3.7 PTHLH启动子区两个SNP位点对基因表达的效应 | 第54-57页 |
| 3.7.1 SNP位点定点突变对基因启动活性的影响 | 第54页 |
| 3.7.2 SNP位点相关转录因子预测 | 第54-55页 |
| 3.7.3 转录因子结合位点鉴定 | 第55-57页 |
| 4.讨论 | 第57-59页 |
| 5.结论 | 第59-60页 |
| 6.参考文献 | 第60-66页 |
| 7.致谢 | 第66-67页 |
| 8.攻读学位期间发表的学术论文及专利 | 第67页 |
