| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 缩略语表（Abbreviation） | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-29页 |
| 1.1 细胞自噬概述 | 第13-24页 |
| 1.1.1 细胞自噬的分类 | 第13-15页 |
| 1.1.2 细胞自噬的作用机理 | 第15-20页 |
| 1.1.3 氨基酸对细胞自噬的调节 | 第20-23页 |
| 1.1.4 细胞自噬的生物学意义 | 第23-24页 |
| 1.2 细胞内氨基酸的感受器及其机制 | 第24-26页 |
| 1.2.1 GCN2 对氨基酸的感应机制 | 第24-25页 |
| 1.2.2 T1R1/T1R3 对氨基酸的感应机制 | 第25页 |
| 1.2.3 LeuRS对氨基酸的感应机制 | 第25页 |
| 1.2.4 SLC38A9 对氨基酸的感应机制 | 第25-26页 |
| 1.3 Cell-free System用于研究自噬信号通路的可行性分析 | 第26-27页 |
| 1.3.1 Cell-free system的概述 | 第26页 |
| 1.3.2 Cell-free system用于mTOR以及自噬信号通路的研究 | 第26-27页 |
| 1.4 iTRAQ技术作为比较蛋白组学研究方法的优缺点分析与应用 | 第27-28页 |
| 1.5 本研究的目的与意义 | 第28-29页 |
| 第二章 材料与方法 | 第29-42页 |
| 2.1 试验材料 | 第29-31页 |
| 2.1.1 细胞系、菌种、载体 | 第29页 |
| 2.1.2 主要药品及试剂 | 第29-30页 |
| 2.1.3 主要培养基及其配制 | 第30页 |
| 2.1.4 试验用缓冲液及其配制 | 第30-31页 |
| 2.2 试验方法 | 第31-42页 |
| 2.2.1 pcDNA4-Atg14-3×Flag表达质粒的构建 | 第31-33页 |
| 2.2.2 细胞培养主要步骤 | 第33-34页 |
| 2.2.3 Atg14-Flag蛋白的纯化 | 第34-35页 |
| 2.2.4 自噬体的粗提取 | 第35-36页 |
| 2.2.5 S100 的制备 | 第36页 |
| 2.2.6 Western blot | 第36-37页 |
| 2.2.7 利用Cell-free system筛选氨基酸 | 第37页 |
| 2.2.8 亮氨酸调节自噬信号通路的差异蛋白质鉴定 | 第37-42页 |
| 第三章 结果与分析 | 第42-67页 |
| 3.1 自噬体的粗提取 | 第42-43页 |
| 3.2 Atg14-Flag融合蛋白的表达纯化 | 第43-44页 |
| 3.2.1 pcDNA4-Atg14-3×Flag表达质粒的构建 | 第43-44页 |
| 3.2.2 重组质粒转染HEK293T表达Atg14-Flag融合蛋白 | 第44页 |
| 3.2.3 Atg14-Flag融合蛋白的纯化 | 第44页 |
| 3.3 Cell-free system的构建 | 第44-45页 |
| 3.4 利用Cell-free system研究亮氨酸、蛋氨酸、苏氨酸对自噬的调节作用 33 3.5 参与亮氨酸调节自噬信号通路的关键差异候选蛋白质的鉴定 | 第45-46页 |
| 3.5 参与亮氨酸调节自噬信号通路的关键差异候选蛋白质的鉴定 | 第46-67页 |
| 3.5.1 Cell-free system下上清和沉淀的蛋白质提取及定量 | 第46-48页 |
| 3.5.2 蛋白质鉴定 | 第48-50页 |
| 3.5.3 差异蛋白质筛选 | 第50-51页 |
| 3.5.4 差异蛋白质的GO分析 | 第51-53页 |
| 3.5.5 差异蛋白质的COG注释 | 第53页 |
| 3.5.6 差异蛋白的代谢通路注释和富集分析 | 第53-63页 |
| 3.5.7 参与亮氨酸调节自噬信号通路的关键差异候选蛋白分析 | 第63-67页 |
| 第四章 讨论与小结 | 第67-70页 |
| 参考文献 | 第70-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 附录 在读期间发表论文 | 第79页 |
