摘要 | 第6-8页 |
Abstract | 第8-9页 |
缩略词表 | 第10-12页 |
1 文献综述 | 第12-20页 |
1.1 副猪嗜血杆菌病 | 第12页 |
1.2 NOD信号通路 | 第12-17页 |
1.2.1 NLRs结构 | 第13-14页 |
1.2.2 NOD1/2-RIP2信号通路 | 第14-16页 |
1.2.3 NOD1/2 与疾病 | 第16-17页 |
1.3 副猪嗜血杆菌(HPS)感染与炎症反应 | 第17-20页 |
1.3.1 HPS感染PK-15细胞激活NF-κB和MAPKs(p38/JNK)信号通路 | 第17-18页 |
1.3.2 HPS感染产生趋化因子 | 第18-20页 |
2 研究目的和意义 | 第20-21页 |
3 材料与方法 | 第21-34页 |
3.1 试验材料 | 第21-25页 |
3.1.1 细胞、菌株、质粒和序列 | 第21-22页 |
3.1.2 主要药品与试剂盒 | 第22-23页 |
3.1.3 主要培养基及其配制 | 第23-24页 |
3.1.4 主要溶液的配制 | 第24-25页 |
3.1.5 主要实验器材 | 第25页 |
3.2 试验方法 | 第25-34页 |
3.2.1 细菌培养 | 第25页 |
3.2.2 大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第25-26页 |
3.2.3 质粒的制备与鉴定 | 第26-28页 |
3.2.4 细胞的转染实验 | 第28-29页 |
3.2.5 Western Blot检测细胞中目的蛋白的表达 | 第29-30页 |
3.2.6 细胞、感染细菌的细胞样品总RNA的提取 | 第30-31页 |
3.2.7 c DNA的合成 | 第31页 |
3.2.8 SYBR Green I实时定量PCR | 第31-32页 |
3.2.9 相对m RNA表达水平的计算 | 第32页 |
3.2.10 双荧光素酶检测实验 | 第32-33页 |
3.2.11 统计学分析 | 第33-34页 |
4 结果与分析 | 第34-43页 |
4.1 HPS感染PK-15细胞后NOD1/2 蛋白表达和RIP2磷酸化水平分析 | 第34-36页 |
4.1.1 HPS感染PK-15细胞后NOD1/2 蛋白表达的动力学分析 | 第34-35页 |
4.1.2 HPS感染PK-15细胞后RIP2蛋白表达及其磷酸化水平分析 | 第35-36页 |
4.2 NOD1/2-RIP2与HPS感染PK-15细胞激活NF-ΚB和MAPKS信号通路的分析 | 第36-40页 |
4.2.1 NOD1、NOD2和RIP2干扰分子的干扰效率检测 | 第36-38页 |
4.2.2 NOD1/2、RIP2基因干扰对HPS感染PK-15细胞后NF-κB启动子活性的影响 | 第38-39页 |
4.2.3 NOD1/2、RIP2基因干扰对HPS感染PK-15细胞后P65的磷酸化水平的影响 | 第39-40页 |
4.2.4 NOD1/2、RIP2基因干扰对HPS感染PK-15细胞后MAPKs通路中P38、JNK和ERK磷酸化水平的影响 | 第40页 |
4.3 NOD1/2、RIP2基因干扰对HPS感染PK-15细胞后CCL4、CCL5和IL-8表达的影响 | 第40-43页 |
5 讨论 | 第43-48页 |
5.1 HPS感染PK-15细胞激活NOD1/2-RIP2信号通路分子机制的研究 | 第43-44页 |
5.2 HPS感染PK-15细胞激活NOD1/2 表达的研究 | 第44页 |
5.3 HPS感染PK-15细胞激活NOD1/2 信号通路和TLRS互联作用的研究 | 第44-48页 |
6 结论 | 第48-49页 |
参考文献 | 第49-57页 |
致谢 | 第57页 |