| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 英文缩写词表 | 第18-21页 |
| 第一章 绪论 | 第21-34页 |
| 1.1 丙型肝炎和丙型肝炎病毒 | 第21-22页 |
| 1.2 丙型肝炎病毒感染机制 | 第22-26页 |
| 1.2.1 CD81受体 | 第22-23页 |
| 1.2.2 SR-BI受体 | 第23页 |
| 1.2.3 Claudin-1受体 | 第23-24页 |
| 1.2.4 Occludin受体 | 第24页 |
| 1.2.5 LDLR受体 | 第24-25页 |
| 1.2.6 GAGs受体 | 第25页 |
| 1.2.7 DC-SIGN受体 | 第25页 |
| 1.2.8 酪氨酸激酶EphA2和EGFR受体 | 第25-26页 |
| 1.3 丙型肝炎病毒感染的致病机制 | 第26-28页 |
| 1.4 丙型肝炎病毒动物模型 | 第28-32页 |
| 1.4.1 人源化小鼠模型 | 第28-29页 |
| 1.4.2 表达人源HCV受体的转基因小鼠模型 | 第29页 |
| 1.4.3 大鼠HCV模型 | 第29-30页 |
| 1.4.4 树鼩HCV模型 | 第30-31页 |
| 1.4.5 斑马鱼HCV模型 | 第31页 |
| 1.4.6 猴HCV模型 | 第31-32页 |
| 1.5 猴干细胞模型在病毒性疾病研究中的必要性 | 第32-33页 |
| 1.6 研究的技术路线 | 第33-34页 |
| 第二章 含人CD81、Occludin慢病毒载体的构建和验证 | 第34-59页 |
| 2.1 引言 | 第34-35页 |
| 2.2 材料和方法 | 第35-37页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第35页 |
| 2.2.2 实验试剂和配方 | 第35-36页 |
| 2.2.3 主要实验仪器 | 第36-37页 |
| 2.3 慢病毒载体的构建 | 第37-43页 |
| 2.3.1 含人CD81和Occudin分子的质粒DNA提取 | 第37页 |
| 2.3.2 人CD81和Occudin分子的PCR扩增 | 第37-38页 |
| 2.3.3 慢病毒载体质粒pLVX-IRES-ZsGreen1的提取 | 第38-39页 |
| 2.3.4 目的片段和质粒载体的双酶切 | 第39页 |
| 2.3.5 酶切后产物的纯化 | 第39-40页 |
| 2.3.6 目的片段和质粒载体的连接 | 第40-41页 |
| 2.3.7 转化实验 | 第41页 |
| 2.3.8 阳性重组子的筛选和鉴定 | 第41页 |
| 2.3.9 阳性重组质粒的提取 | 第41-42页 |
| 2.3.10 酶切验证和测序验证 | 第42-43页 |
| 2.4 慢病毒载体的包装 | 第43页 |
| 2.4.1 慢病毒三质粒系统 | 第43页 |
| 2.4.2 慢病毒质粒转染293T细胞 | 第43页 |
| 2.4.3 慢病毒粒子的收获、浓缩和滴度的测定 | 第43页 |
| 2.5 慢病毒感染分子和蛋白验证 | 第43-48页 |
| 2.5.1 含人CD81和Occludin两种分子的慢病毒感染靶细胞 | 第43-44页 |
| 2.5.1.1 两种慢病毒分别感染HepG2和CHO细胞 | 第43-44页 |
| 2.5.2 人CD81和Occludin在靶细胞中的检测 | 第44-48页 |
| 2.5.2.1 感染后HepG2和CHO细胞中CD81和Occludin mRNA检测 | 第44-45页 |
| 2.5.2.2 感染后HepG2和CHO细胞的CD81和Occludin间接免疫荧光检测 | 第45-46页 |
| 2.5.2.3 感染后HepG2和CHO细胞的CD81和Occludin的FACE检测 | 第46页 |
| 2.5.2.4 感染后HepG2和CHO细胞的CD81和Occludin Western-blot检测 | 第46-48页 |
| 2.6 实验结果与分析 | 第48-57页 |
| 2.6.1 慢病毒载体的构建 | 第48-52页 |
| 2.6.1.1 人CD81和Occudin分子的PCR扩增 | 第48页 |
| 2.6.1.2 慢病毒载体质粒pLVX-IRES-ZsGreen1的提取 | 第48-49页 |
| 2.6.1.3 目的片段和质粒载体的双酶切 | 第49页 |
| 2.6.1.4 酶切后产物的纯化 | 第49页 |
| 2.6.1.5 目的片段和质粒载体的连接 | 第49页 |
| 2.6.1.6 转化实验 | 第49页 |
| 2.6.1.7 阳性重组子的筛选和鉴定 | 第49-50页 |
| 2.6.1.8 阳性重组质粒的提取 | 第50页 |
| 2.6.1.9 酶切验证和测序验证 | 第50-52页 |
| 2.6.2 慢病毒载体的包装 | 第52-53页 |
| 2.6.2.1 慢病毒三质粒系统 | 第52页 |
| 2.6.2.2 慢病毒质粒转染293T细胞 | 第52-53页 |
| 2.6.2.3 慢病毒粒子的收获、浓缩和滴度的测定 | 第53页 |
| 2.6.3 慢病毒感染的分子和蛋白验证 | 第53-57页 |
| 2.6.3.1 含人CD81和Occludin两种分子的慢病毒感染靶细胞 | 第53-54页 |
| 2.6.3.2 感染后HepG2和CHO细胞的CD81和Occludin分子检测 | 第54页 |
| 2.6.3.3 感染后HepG2和CHO细胞的CD81和Occludin免疫荧光检测 | 第54-56页 |
| 2.6.3.4 感染后HepG2和CHO细胞的CD81和Occludin流式检测 | 第56页 |
| 2.6.3.5 感染后HepG2和CHO细胞的CD81和Occludin Westernblot检测 | 第56-57页 |
| 2.7 讨论 | 第57-58页 |
| 2.8 本章小结 | 第58-59页 |
| 第三章 猕猴骨髓间充质干细胞分离培养和鉴定及慢病毒感染 | 第59-72页 |
| 3.1 引言 | 第59-60页 |
| 3.2 材料与方法 | 第60-61页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第60页 |
| 3.2.2 实验试剂和配方 | 第60-61页 |
| 3.2.3 主要仪器设备 | 第61页 |
| 3.3 猕猴骨髓间充质干细胞的分离培养和传代培养 | 第61-62页 |
| 3.4 猕猴骨髓间充质干细胞的观察与鉴定 | 第62-63页 |
| 3.4.1 猕猴骨髓间充质干细胞的表面分子鉴定 | 第62页 |
| 3.4.2 猕猴骨髓间充质干细胞诱导分化的功能鉴定 | 第62-63页 |
| 3.5 慢病毒感染猕猴骨髓间充质干细胞 | 第63-66页 |
| 3.5.1 含CD81和Occludin两种慢病毒感染猕猴骨髓间充质干细胞 | 第63-64页 |
| 3.5.2 感染后猕猴骨髓间充质干细胞CD81和Occludin间接免疫荧光检测 | 第64页 |
| 3.5.3 感染后猕猴骨髓间充质干细胞的CD81、Occludin Western-blot检测 | 第64-66页 |
| 3.6 猕猴骨髓间充质干细胞的冻存与复苏 | 第66页 |
| 3.6.1 猕猴骨髓间充质干细胞的冻存 | 第66页 |
| 3.6.2 猕猴骨髓间充质干细胞的复苏 | 第66页 |
| 3.7 实验结果与分析 | 第66-70页 |
| 3.7.1 猕猴骨髓间充质干细胞的鉴定和慢病毒感染 | 第66-68页 |
| 3.7.1.1 猕猴骨髓间充质干细胞的表面分子鉴定 | 第67页 |
| 3.7.1.2 猕猴骨髓间充质干细胞的功能鉴定 | 第67-68页 |
| 3.7.2 慢病毒感染猕猴骨髓间充质干细胞 | 第68-70页 |
| 3.7.2.1 分别含CD81/Occludin慢病毒感染MSC细胞 | 第68-69页 |
| 3.7.2.2 慢病毒感染MSC细胞后CD81和Occludin分子的免疫荧光检测 | 第69页 |
| 3.7.2.3 慢病毒感染MSC细胞后CD81和Occludin分子的Western-blot检测 | 第69-70页 |
| 3.7.3 猕猴骨髓间充质干细胞的冻存与复苏 | 第70页 |
| 3.8 讨论 | 第70-71页 |
| 3.9 本章小结 | 第71-72页 |
| 第四章 HCV对猕猴骨髓间充质干细胞感染研究 | 第72-84页 |
| 4.1 引言 | 第72页 |
| 4.2 实验材料与方法 | 第72-74页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第72-73页 |
| 4.2.2 实验主要试剂 | 第73页 |
| 4.2.3 实验主要设备仪器 | 第73-74页 |
| 4.3 Huh7.5.1细胞及HCVcc J6/JFH1病毒株的培养 | 第74页 |
| 4.3.1 Huh7.5.1细胞的培养 | 第74页 |
| 4.3.2 HCVcc J6/JFH1病毒株的培养 | 第74页 |
| 4.4 HCVcc对猕猴骨髓间充质干细胞感染性比较分析 | 第74-79页 |
| 4.4.1 HCVcc感染靶细胞后RNA的提取 | 第74-77页 |
| 4.4.2 HCVcc入胞后定性检测 | 第77-78页 |
| 4.4.3 HCVcc入胞后RT-PCR检测 | 第78-79页 |
| 4.5 HCVpp对猕猴骨髓间充质干细胞感染性初步探究 | 第79-80页 |
| 4.6 实验结果与分析 | 第80-82页 |
| 4.6.1 HCVcc靶细胞的比较 | 第80-81页 |
| 4.6.2 免疫荧光检测HCVpp在各靶细胞中的表达 | 第81-82页 |
| 4.7 讨论 | 第82-83页 |
| 4.8 本章小结 | 第83-84页 |
| 第五章 结论 | 第84-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-95页 |
| 附录A 攻读硕士期间发表论文目录 | 第95-96页 |
| 附录B 其他需要说明的内容 | 第96页 |
