中文摘要 | 第9-17页 |
英文摘要 | 第17-27页 |
前言 | 第28-31页 |
材料和方法 | 第31-41页 |
1.实验材料 | 第31-34页 |
1.1 实验对象 | 第31-32页 |
1.2 主要试剂 | 第32-34页 |
1.3 主要仪器 | 第34页 |
2. 实验方法 | 第34-41页 |
2.1 细胞培养 | 第34-35页 |
2.2 膜蛋白提取和N-糖链的制备 | 第35页 |
2.3 质谱仪检测甲基化的N-糖链 | 第35页 |
2.4 慢病毒制备及转染 | 第35-36页 |
2.5 RNA提取和实时荧光定量PCR分析(qRT-PCR) | 第36-37页 |
2.6 蛋白提取和免疫印迹分析 | 第37页 |
2.7 CCK-8 细胞增殖实验 | 第37-38页 |
2.8 划痕试验 | 第38页 |
2.9 细胞侵袭实验 | 第38页 |
2.10 免疫荧光实验 | 第38-39页 |
2.11 裸鼠体内成瘤实验 | 第39页 |
2.12 免疫组织化学 | 第39-40页 |
2.13 双荧光素酶实验 | 第40页 |
2.14 统计学分析 | 第40-41页 |
第一部分 质谱分析乳腺癌组织和细胞株表面N-糖链的组成差异 | 第41-46页 |
结果 | 第41-44页 |
1.乳腺癌组织和癌旁组织膜蛋白N-糖链的组成 | 第41-42页 |
2.乳腺癌细胞株及正常乳腺上皮细胞膜蛋白N-糖链的组成 | 第42-44页 |
讨论 | 第44-45页 |
结论 | 第45-46页 |
第二部分 实时荧光定量PCR检测组织和细胞株唾液酸糖基转移酶(ST) 基因mRNA的表达及ST8SIA4在组织和细胞株中蛋白的表达 | 第46-50页 |
结果 | 第46-49页 |
1. 唾液酸糖基转移酶(ST)基因在乳腺癌和癌旁组织中的表达 | 第46-47页 |
2. 唾液酸糖基转移酶(ST)基因在乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MCF-7 及正常乳腺上皮细胞株MCF-10A中的表达 | 第47页 |
3. ST8SIA4在乳腺癌组织及细胞株中的表达 | 第47-49页 |
讨论 | 第49页 |
结论 | 第49-50页 |
第三部分 特异性下调MDA-MB-231 细胞中的ST8SIA4的表达,观察其对乳腺癌细胞体外的增殖和侵袭能力、体内成瘤性的影响 | 第50-55页 |
结果 | 第50-53页 |
1. ST8SIA4的表达调控对乳腺癌MDA-MB-231 细胞体外增殖和侵袭能力的影响 | 第50-52页 |
2. ST8SIA4的表达调控对乳腺癌MDA-MB-231 细胞体内成瘤性的影响 | 第52-53页 |
讨论 | 第53-54页 |
结论 | 第54-55页 |
第四部分 mi R-26a和miR-26b对ST8SIA4的靶向调控作用 | 第55-61页 |
结果 | 第55-59页 |
1. miR26a和miR26b在乳腺癌组织及细胞株中的表达 | 第55-56页 |
2.miR-26a和miR-26b的表达调控介导ST8SIA4表达 | 第56-57页 |
3. ST8SIA4为miR-26a和miR-26b的靶基因 | 第57-59页 |
讨论 | 第59-60页 |
结论 | 第60-61页 |
第五部分 mi R-26a/b靶向调控ST8SIA4的表达对乳腺癌细胞增殖和侵袭能力的影响 | 第61-72页 |
结果 | 第61-70页 |
1. miR-26a/26b靶向调控ST8SIA4的表达对MDA-MB-231 细胞增殖和侵袭能力的影响 | 第61-65页 |
2. miR-26a/26b靶向调控ST8SIA4的表达对MCF-7 细胞增殖和侵袭能力的影响 | 第65-70页 |
讨论 | 第70-72页 |
结论 | 第72-73页 |
全文讨论 | 第73-79页 |
全文结论 | 第79-80页 |
参考文献 | 第80-85页 |
综述 | 第85-97页 |
参考文献 | 第93-97页 |
攻读学位期间发表文章情况 | 第97-98页 |
致谢 | 第98页 |