解脂耶氏酵母亲环素的原核表达与纯化
| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-9页 |
| 第一章 前言 | 第9-18页 |
| ·引言 | 第9页 |
| ·亲环素家族 | 第9-10页 |
| ·亲环素的分子结构 | 第10-12页 |
| ·亲环素的分布与亚细胞定位 | 第12页 |
| ·亲环素生物活性的研究 | 第12-14页 |
| ·PPIase活性 | 第12-13页 |
| ·分子伴侣 | 第13页 |
| ·核酸酶活性 | 第13-14页 |
| ·亲环素生物学功能的研究 | 第14-17页 |
| ·免疫抑制 | 第14-15页 |
| ·氧化应激 | 第15页 |
| ·胆固醇代谢 | 第15页 |
| ·HIV病毒感染 | 第15-16页 |
| ·植物发育 | 第16-17页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第17-18页 |
| 第二章 实验材料 | 第18-25页 |
| ·主要的仪器 | 第18页 |
| ·主要的试剂 | 第18-19页 |
| ·菌株及其培养基 | 第19-20页 |
| ·主要溶液和缓冲液配制 | 第20-22页 |
| ·核酸提取类缓冲液 | 第20页 |
| ·电泳类缓冲液 | 第20-21页 |
| ·其它溶液 | 第21-22页 |
| ·电泳凝胶 | 第22页 |
| ·引物和质粒 | 第22-25页 |
| ·载体质粒 | 第22-24页 |
| ·实验引物 | 第24-25页 |
| 第三章 实验方法 | 第25-38页 |
| ·实验技术路线 | 第25-26页 |
| ·亲环素基因克隆载体构建 | 第26-33页 |
| ·菌种复苏 | 第26页 |
| ·解脂耶氏酵母基因组DNA的提取 | 第26-27页 |
| ·基因组DNA的电泳检测 | 第27页 |
| ·DNA浓度测定 | 第27页 |
| ·PCR扩增目的基因 | 第27-28页 |
| ·PCR结果鉴定 | 第28页 |
| ·割胶回收纯化 | 第28-29页 |
| ·DH5a感受态制备 | 第29页 |
| ·克隆载体构建 | 第29-30页 |
| ·克隆质粒转化细菌 | 第30页 |
| ·菌落PCR重组子鉴定 | 第30-31页 |
| ·阳性菌扩大培养 | 第31页 |
| ·阳性菌质粒提取 | 第31-32页 |
| ·重组质粒双酶切鉴定 | 第32页 |
| ·菌液测序 | 第32-33页 |
| ·亲环素基因原核表达载体构建 | 第33-34页 |
| ·克隆载体和表达质粒双酶切 | 第33页 |
| ·目的片段和双酶切PET32a的连接与转化 | 第33-34页 |
| ·PET32a-Cyp质粒鉴定 | 第34页 |
| ·表达菌保种 | 第34页 |
| ·亲环素基因原核表达与纯化 | 第34-38页 |
| ·诱导表达 | 第34-35页 |
| ·重组蛋白表达SDS-PAGE检测 | 第35页 |
| ·蛋白包涵体SDS-PAGE检测 | 第35-36页 |
| ·亲环素重组蛋白纯化 | 第36-38页 |
| 第四章 结果与分析 | 第38-52页 |
| ·亲环素基因克隆载体构建 | 第38-47页 |
| ·总DNA提取结果与分析 | 第38-39页 |
| ·PCR扩增结果与分析 | 第39页 |
| ·菌落PCR阳性菌鉴定结果 | 第39-40页 |
| ·阳性菌质粒提取结果 | 第40-41页 |
| ·质粒双酶切鉴定与分析 | 第41-42页 |
| ·克隆载体测序结果与分析 | 第42-47页 |
| ·亲环素基因表达载体构建 | 第47-48页 |
| ·PET32a双酶切结果 | 第47-48页 |
| ·菌落PCR表达菌鉴定结果 | 第48页 |
| ·原核表达和纯化的结果与分析 | 第48-52页 |
| ·重组蛋白表达结果 | 第48-50页 |
| ·蛋白包涵体检测结果 | 第50页 |
| ·亲环素重组蛋白纯化结果 | 第50-52页 |
| 第五章 讨论 | 第52-56页 |
| ·克隆目的基因 | 第52-53页 |
| ·展望 | 第53-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-61页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第61页 |
