| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 第一部分：文献综述 | 第12-19页 |
| 1.1 髓系白血病 | 第12-13页 |
| 1.2 斑马鱼的造血过程 | 第13-14页 |
| 1.3 IRF8和PU.1调控髓系细胞发育的研究进展 | 第14-15页 |
| 1.4 TALENs介导的基因敲除技术 | 第15-17页 |
| 1.5 ENU介导的正向遗传突变筛选 | 第17-19页 |
| 第二部分：材料与方法 | 第19-40页 |
| 2.1 实验动物 | 第19页 |
| 2.2 试剂、耗材和仪器 | 第19-21页 |
| 2.2.1 主要试剂 | 第19-21页 |
| 2.2.2 主要耗材 | 第21页 |
| 2.2.3 主要仪器 | 第21页 |
| 2.3 试剂配方 | 第21-24页 |
| 2.3.1 LB培养基 | 第21-22页 |
| 2.3.2 原位杂交相关试剂 | 第22-23页 |
| 2.3.3 抗生素溶液 | 第23页 |
| 2.3.4 大肠杆菌E.coli化学感受态细胞的制备相关试剂 | 第23页 |
| 2.3.5 HE染色液配制 | 第23-24页 |
| 2.3.6 其他溶液 | 第24页 |
| 2.4 基因组DNA提取 | 第24页 |
| 2.5 目的基因片段扩增—聚合酶链式反应 | 第24-25页 |
| 2.6 PCR产物纯化 | 第25页 |
| 2.7 突变体irf8~(△57/△57)及pu.1~(G242D/G242D)的鉴定 | 第25-26页 |
| 2.8 全胚total RNA提取 | 第26-27页 |
| 2.9 成年斑马鱼肾脏血血液细胞total RNA提取 | 第27页 |
| 2.10 cDNA第一条链合成 | 第27页 |
| 2.11 实时荧光定量PCR | 第27-28页 |
| 2.12 大肠杆菌E.coli化学感受态细胞的制备 | 第28-29页 |
| 2.13 体外合成mRNA | 第29-30页 |
| 2.14 质粒转化与扩增 | 第30-31页 |
| 2.15 反义RNA探针的制备 | 第31-32页 |
| 2.15.1 线性化模板 | 第31页 |
| 2.15.2 反义RNA探针的合成和纯化 | 第31-32页 |
| 2.16 胚胎显微注射 | 第32-33页 |
| 2.17 苏丹黑B染色 | 第33页 |
| 2.18 中性红染色 | 第33页 |
| 2.19 全胚免疫荧光化学 | 第33-34页 |
| 2.20 全胚RNA原位杂交 | 第34-35页 |
| 2.21 全胚TUNEL实验 | 第35-36页 |
| 2.22 胚胎活体AO(Acridine Orange)染色 | 第36页 |
| 2.23 成年斑马鱼肾脏血血液细胞提取 | 第36页 |
| 2.24 成年斑马鱼外周血血液细胞涂片制备 | 第36页 |
| 2.25 成年斑马鱼肾脏血血液细胞涂片制备 | 第36-37页 |
| 2.26 吉姆萨染色 | 第37页 |
| 2.27 成年斑马鱼肾脏血血液细胞移植 | 第37页 |
| 2.28 石蜡切片制备 | 第37-38页 |
| 2.29 石蜡切片HE(苏木精—伊红)染色 | 第38页 |
| 2.30 石蜡切片荧光免疫组织化学 | 第38-39页 |
| 2.31 石蜡切片TUNEL与抗体共染 | 第39-40页 |
| 第三部分：实验结果 | 第40-63页 |
| 3.1 通过TALENs技术获得irf8突变体 | 第40-42页 |
| 3.1.1 突变位点的选择与TALENs质粒构建 | 第40页 |
| 3.1.2 irf8突变体产生与筛选鉴定 | 第40页 |
| 3.1.3 irf8突变体蛋白稳定性检测 | 第40-42页 |
| 3.2 原始造血过程中irf8突变体的表型分析 | 第42-43页 |
| 3.3 胚胎发育的永久造血过程中irf8突变体表型分析 | 第43-46页 |
| 3.4 irf8突变体中microglia缺失导致胚胎早期CNS中凋亡细胞显著增多 | 第46-48页 |
| 3.5 irf8调控斑马鱼幼鱼时期的髓系细胞增殖 | 第48-50页 |
| 3.6 Irf8缺失导致成年斑马鱼表现出类似CML的症状 | 第50-54页 |
| 3.6.1 irf8突变成鱼血相分析 | 第50-51页 |
| 3.6.2 irf8突变体粒细胞在组织器官中大量浸润 | 第51-53页 |
| 3.6.3 irf8突变体肾脏血细胞移植实验 | 第53-54页 |
| 3.7 Irf8作为肿瘤抑制因子调控髓系细胞增殖和凋亡 | 第54-56页 |
| 3.8 在双突变体irf8~(157/△57)/pu.1~(G242D/G242D)中不成熟的粒细胞大量增生 | 第56-58页 |
| 3.8.1 双突变体irf8~(△57/△57)/pu.1~(G242D/G242D)的获得及存活率追踪 | 第56页 |
| 3.8.2 双突变irf8~(△57/△57)/pu.1~(G242D/G242D)成鱼血相分析 | 第56-58页 |
| 3.8.3 双突变irf8~(△57/△57)/pu.1~(G242D/G242D)幼鱼髓系细胞分析 | 第58页 |
| 3.9 irf8突变体背景上pu.1功能缺陷会导致髓系细胞大量浸润及器官异常 | 第58-60页 |
| 3.10 ENU遗传突变筛选得到irf8的点突变体 | 第60-63页 |
| 3.10.1 ENU筛选得到microglia发育缺陷/异常的突变体 | 第60-62页 |
| 3.10.2 V5-2突变体突变位点鉴定 | 第62-63页 |
| 第四部分：讨论与分析 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-69页 |
| 附录 | 第69-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 在读期间发表的文章 | 第72-73页 |
| 在读期间参加研究课题情况 | 第73页 |
