| 摘要 | 第6-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第18-35页 |
| 1.1 小麦条锈病与条锈菌 | 第18-22页 |
| 1.1.1 小麦条锈病的危害与流行 | 第18页 |
| 1.1.2 小麦条锈菌的生物学特性 | 第18-21页 |
| 1.1.3 小麦条锈菌致病机制的研究进展 | 第21-22页 |
| 1.2 植物病原菌效应基因的研究进展 | 第22-29页 |
| 1.2.1 效应基因在植物—病原菌互作中的作用 | 第22-23页 |
| 1.2.2 效应基因的序列特征 | 第23页 |
| 1.2.3 效应蛋白的主要分类 | 第23-24页 |
| 1.2.4 效应基因的鉴定方法 | 第24-26页 |
| 1.2.5 效应基因的毒性作用机制 | 第26-27页 |
| 1.2.6 已克隆到的病原菌无毒基因 | 第27-28页 |
| 1.2.7 无毒蛋白与抗病蛋白的互作机制 | 第28-29页 |
| 1.3 病原菌Ras基因的研究进展 | 第29-32页 |
| 1.3.1 Ras基因的发现与蛋白结构 | 第29页 |
| 1.3.2 Ras基因在细胞信号转导中的作用 | 第29-30页 |
| 1.3.3 Ras基因在真菌生长发育及病菌致病过程中的作用 | 第30-31页 |
| 1.3.4 Ras基因在真菌细胞程序性死亡中的作用 | 第31-32页 |
| 1.4 病原菌SR蛋白激酶基因的研究进展 | 第32-34页 |
| 1.4.1 蛋白激酶的分类及其在细胞信号转导中的作用 | 第32-33页 |
| 1.4.2 SR蛋白激酶的结构及功能 | 第33-34页 |
| 1.4.3 SRPK基因在酵母及致病真菌中的作用 | 第34页 |
| 1.5 本研究的目的与意义 | 第34-35页 |
| 第二章 效应基因鉴定及其功能研究 | 第35-62页 |
| 2.1 引言 | 第35页 |
| 2.2 材料、试剂和仪器 | 第35-37页 |
| 2.2.1 植物材料 | 第35-36页 |
| 2.2.2 菌种 | 第36页 |
| 2.2.3 载体 | 第36页 |
| 2.2.4 试剂 | 第36-37页 |
| 2.2.5 仪器 | 第37页 |
| 2.3 实验方法 | 第37-45页 |
| 2.3.1 小麦条锈菌的接种与繁殖 | 第37页 |
| 2.3.2 定量PCR样品的采集 | 第37页 |
| 2.3.3 总RNA提取 | 第37-38页 |
| 2.3.4 小麦条锈菌基因组中编码分泌蛋白的基因筛选 | 第38页 |
| 2.3.5 序列分析及比对 | 第38页 |
| 2.3.6 基因的种内序列多态性分析 | 第38-39页 |
| 2.3.7 农杆菌介导的PVX病毒表达系统 | 第39-40页 |
| 2.3.8 细菌T3SS介导的瞬时表达 | 第40-41页 |
| 2.3.9 蛋白在烟草中的亚细胞定位实验 | 第41-42页 |
| 2.3.10 信号肽分泌功能的验证 | 第42页 |
| 2.3.11 效应蛋白在大豆根尖中的转运实验 | 第42-43页 |
| 2.3.12 组织学研究 | 第43-45页 |
| 2.4 结果与分析 | 第45-60页 |
| 2.4.1 候选效应基因的生物信息学筛选及克隆 | 第45页 |
| 2.4.2 筛选抑制BAX诱导PCD的效应基因 | 第45-46页 |
| 2.4.3 效应基因的蛋白序列特征 | 第46-47页 |
| 2.4.4 信号肽分泌功能的验证 | 第47-49页 |
| 2.4.5 效应基因的种间和种内序列多态性分析 | 第49-50页 |
| 2.4.6 效应基因在小麦条锈菌不同侵染阶段的表达特征分析 | 第50-52页 |
| 2.4.7 效应基因能够抑制小麦的PTI | 第52-53页 |
| 2.4.8 效应基因能够抑制小麦的ETI | 第53-54页 |
| 2.4.9 效应基因的无毒性功能分析 | 第54-56页 |
| 2.4.10 效应蛋白转运进入植物细胞不依赖于病原菌 | 第56-58页 |
| 2.4.11 Y/F/WxC基序不负责小麦条锈菌效应蛋白的转运 | 第58-60页 |
| 2.5 讨论 | 第60-62页 |
| 第三章 效应基因的毒性机制研究 | 第62-85页 |
| 3.1 引言 | 第62页 |
| 3.2 材料、试剂和仪器 | 第62-64页 |
| 3.2.1 植物材料和菌种 | 第62-63页 |
| 3.2.2 载体 | 第63页 |
| 3.2.3 试剂 | 第63-64页 |
| 3.2.4 仪器 | 第64页 |
| 3.3 实验方法 | 第64-70页 |
| 3.3.1 小麦条锈菌的接种与繁殖 | 第64页 |
| 3.3.2 定量PCR样品的采集 | 第64页 |
| 3.3.3 总RNA提取与纯化 | 第64页 |
| 3.3.4 序列分析及比对 | 第64-65页 |
| 3.3.5 BSMV介导的基因沉默实验 | 第65-66页 |
| 3.3.6 小麦原生质体的蛋白亚细胞定位 | 第66-67页 |
| 3.3.7 小麦原生质体的BIFC实验 | 第67页 |
| 3.3.8 酵母双杂交 | 第67-69页 |
| 3.3.9 组织学研究 | 第69-70页 |
| 3.4 结果与分析 | 第70-83页 |
| 3.4.1 关键效应基因PsKE1 和PsKE2 的选取 | 第70页 |
| 3.4.2 HIGS沉默PsKE1 和PsKE2 | 第70-73页 |
| 3.4.3 PsKE1 和PsKE2 互作靶标的筛选 | 第73-76页 |
| 3.4.4 PsKE1、PsKE2 和小麦靶标蛋白的亚细胞定位 | 第76-78页 |
| 3.4.5 BIFC验证条锈菌效应蛋白和小麦靶标蛋白的植物体内互作 | 第78-80页 |
| 3.4.6 小麦靶标基因的转录表达特征 | 第80页 |
| 3.4.7 VIGS沉默小麦靶标基因 | 第80-83页 |
| 3.5 讨论 | 第83-85页 |
| 第四章 信号转导途径中Ras基因的鉴定及其功能研究 | 第85-103页 |
| 4.1 引言 | 第85-86页 |
| 4.2 材料、试剂和仪器 | 第86页 |
| 4.2.1 植物材料和菌种 | 第86页 |
| 4.2.2 载体 | 第86页 |
| 4.2.3 试剂和仪器 | 第86页 |
| 4.3 实验方法 | 第86-88页 |
| 4.3.1 小麦条锈菌的接种与繁殖 | 第86页 |
| 4.3.2 定量PCR样品的采集 | 第86-87页 |
| 4.3.3 总RNA提取与纯化 | 第87页 |
| 4.3.4 序列分析及比对 | 第87页 |
| 4.3.5 基因的种内多态性分析 | 第87页 |
| 4.3.6 BSMV介导的基因沉默实验 | 第87页 |
| 4.3.7 细菌T3SS介导的瞬时表达 | 第87页 |
| 4.3.8 组织学研究 | 第87-88页 |
| 4.4 结果与分析 | 第88-101页 |
| 4.4.1 小麦条锈菌基因组有两个Ras基因 | 第88页 |
| 4.4.2 PsRas1 和PsRas2 的种内序列多态性分析 | 第88-91页 |
| 4.4.3 PsRas1 和PsRas2 具有不同的转录表达特征 | 第91页 |
| 4.4.4 HIGS沉默PsRas1 和PsRas2 | 第91-94页 |
| 4.4.5 PsRas2 不能互补小麦赤霉菌ras2 突变体 | 第94页 |
| 4.4.6 植物中瞬时表达PsRas1 能诱导植物PCD | 第94-96页 |
| 4.4.7 PsRas1 诱导的植物PCD表现出和植物HR类似的细胞学特征 | 第96-97页 |
| 4.4.8 PsRas1 蛋白中所有Ras GTPases保守结构域均负责其诱导PCD | 第97-98页 |
| 4.4.9 植物的MAPK级联途径参与了PsRas1 诱导的植物PCD | 第98-101页 |
| 4.5 讨论 | 第101-103页 |
| 第五章 禾谷类锈菌特有激酶基因PsSRPKL的鉴定及其功能研究 | 第103-122页 |
| 5.1 引言 | 第103-104页 |
| 5.2 材料、试剂和仪器 | 第104页 |
| 5.2.1 植物材料和菌种 | 第104页 |
| 5.2.2 载体 | 第104页 |
| 5.2.3 试剂和仪器 | 第104页 |
| 5.3 实验方法 | 第104-107页 |
| 5.3.1 条锈菌的接种与繁殖 | 第104页 |
| 5.3.2 定量PCR样品的采集 | 第104页 |
| 5.3.3 总RNA提取与纯化 | 第104-105页 |
| 5.3.4 序列分析及比对 | 第105页 |
| 5.3.5 基因的种内多态性分析 | 第105页 |
| 5.3.6 BSMV介导的基因沉默实验 | 第105页 |
| 5.3.7 蛋白在烟草中的亚细胞定位实验 | 第105页 |
| 5.3.8 拟南芥原生质体亚细胞定位试验 | 第105-106页 |
| 5.3.9 裂殖酵母中过表达技术 | 第106-107页 |
| 5.3.10 组织学研究 | 第107页 |
| 5.4 结果与分析 | 第107-120页 |
| 5.4.1 PsSRPKL基因的克隆与表达特征 | 第107-108页 |
| 5.4.2 PsSRPKL蛋白的结构分析 | 第108-109页 |
| 5.4.3 PsSRPKL属于禾谷类锈菌特有激酶 | 第109-111页 |
| 5.4.4 其它禾谷类锈菌特有激酶基因的序列及转录表达特征 | 第111-112页 |
| 5.4.5 PsSRPKL的种内序列多态性分析 | 第112-114页 |
| 5.4.6 PsSRPKL定位于细胞核 | 第114-115页 |
| 5.4.7 裂殖酵母中过表达PsSRPKL引起形态畸形和降低对环境刺激的抗性 | 第115-116页 |
| 5.4.8 HIGS沉默PsSRPKL会减弱条锈菌在小麦上的致病表型 | 第116-117页 |
| 5.4.9 沉默PsSRPKL会抑制条锈菌的菌丝发育和增加寄主细胞活性氧的积累 | 第117-120页 |
| 5.5 讨论 | 第120-122页 |
| 第六章 全文结论与展望 | 第122-124页 |
| 参考文献 | 第124-143页 |
| 附录 | 第143-154页 |
| 致谢 | 第154-156页 |
| 个人简介 | 第156-157页 |
