| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第一章 绪论 | 第18-30页 |
| 1.1 3-羟基丙酸的研究概述 | 第18-24页 |
| 1.1.1 性质及应用 | 第18页 |
| 1.1.2 3-羟基丙酸的生产 | 第18-19页 |
| 1.1.3 生物合成法生产3-羟基丙酸 | 第19-21页 |
| 1.1.4 基因工程菌生产3-羟基丙酸 | 第21-22页 |
| 1.1.5 基因工程菌产3-羟基丙酸研究进展 | 第22-23页 |
| 1.1.6 K. pneumoniae中的甘油代谢途径 | 第23-24页 |
| 1.2 启动子筛选 | 第24-27页 |
| 1.2.1 启动子概述 | 第24-25页 |
| 1.2.2 启动子工程 | 第25-26页 |
| 1.2.3 启动子筛选 | 第26-27页 |
| 1.3 复合启动子 | 第27页 |
| 1.4 本课题研究意义 | 第27-30页 |
| 第二章 K.pneumoniae高效表达系统的构建 | 第30-46页 |
| 2.1 引言 | 第30页 |
| 2.2 实验材料 | 第30-32页 |
| 2.2.1 菌株和载体 | 第30页 |
| 2.2.2 主要试剂及仪器 | 第30-31页 |
| 2.2.3 培养基 | 第31-32页 |
| 2.3 试验方法 | 第32-37页 |
| 2.3.1 基因组模板的提取 | 第32页 |
| 2.3.2 质粒载体的提取 | 第32-33页 |
| 2.3.3 组成型启动子片段的克隆 | 第33页 |
| 2.3.4 目的基因PCR产物回收 | 第33-34页 |
| 2.3.5 组成型表达载体的构建 | 第34页 |
| 2.3.6 组成型表达载体的鉴定 | 第34-35页 |
| 2.3.7 报告基因GFP的克隆 | 第35页 |
| 2.3.8 以GFP为报道基因的重组质粒的构建 | 第35-36页 |
| 2.3.9 以GFP为报道基因的重组质粒的鉴定 | 第36页 |
| 2.3.10 K.pneumoniae感受态细胞制备及电转化 | 第36-37页 |
| 2.3.11 重组菌的筛选与鉴定 | 第37页 |
| 2.3.12 重组菌的发酵培养 | 第37页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第37-43页 |
| 2.4.1 K.pneumoniae DSM2026基因组的提取 | 第37-38页 |
| 2.4.2 组成型启动子基因的克隆 | 第38-39页 |
| 2.4.3 组成型表达载体的构建与鉴定 | 第39-40页 |
| 2.4.4 报告基因GFP的克隆 | 第40页 |
| 2.4.5 以GFP为报道基因的重组质粒的构建与鉴定 | 第40-41页 |
| 2.4.6 重组菌的构建与鉴定 | 第41-42页 |
| 2.4.7 重组菌荧光强度测定 | 第42-43页 |
| 2.5 本章小结 | 第43-46页 |
| 第三章 利用组成型表达系统生产3-HP的研究 | 第46-60页 |
| 3.1 引言 | 第46页 |
| 3.2 实验材料 | 第46-47页 |
| 3.2.1 菌株和载体 | 第46页 |
| 3.2.2 主要试剂及仪器 | 第46-47页 |
| 3.2.3 培养基 | 第47页 |
| 3.3 试验方法 | 第47-51页 |
| 3.3.1 获取基因组 | 第47页 |
| 3.3.2 目的基因aldH的克隆 | 第47-48页 |
| 3.3.3 重组质粒(pETP_(kan)-aldH)的构建 | 第48-49页 |
| 3.3.4 重组质粒(pETP_(kan)-aldH)的鉴定 | 第49页 |
| 3.3.5 K.pneumoniae感受态细胞制备及电转化 | 第49页 |
| 3.3.6 重组菌K.p(pETPkan-aldH)的筛选与鉴定 | 第49页 |
| 3.3.7 重组菌微氧摇瓶发酵 | 第49-50页 |
| 3.3.8 重组菌微氧批式流加发酵 | 第50页 |
| 3.3.9 重组菌生长曲线绘制 | 第50页 |
| 3.3.10 甘油剩余量的测定 | 第50页 |
| 3.3.11 重组菌3-HP及副产物产量 | 第50-51页 |
| 3.3.12 重组菌aldH基因的表达 | 第51页 |
| 3.3.13 重组菌酶活测定 | 第51页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第51-58页 |
| 3.4.1 E.coli DH5α基因组提取 | 第51-52页 |
| 3.4.2 目的基因aldH的克隆 | 第52页 |
| 3.4.3 重组质粒pETP_(kan)-aldH的鉴定 | 第52-53页 |
| 3.4.4 重组菌K. p(pETP_(kan)-aldH)的鉴定 | 第53-54页 |
| 3.4.5 重组菌醛脱氢酶的表达 | 第54页 |
| 3.4.6 重组菌醛脱氢酶的酶活测定 | 第54-55页 |
| 3.4.7 重组菌微氧摇瓶发酵产3-HP | 第55-57页 |
| 3.4.8 重组菌上罐发酵 | 第57-58页 |
| 3.5 本章小结 | 第58-60页 |
| 第四章 利用复合启动子构建高效表达系统生产3-HP | 第60-76页 |
| 4.1 引言 | 第60页 |
| 4.2 实验材料 | 第60-61页 |
| 4.2.1 菌株和载体 | 第60页 |
| 4.2.2 主要试剂及仪器 | 第60-61页 |
| 4.2.3 培养基 | 第61页 |
| 4.3 试验方法 | 第61-66页 |
| 4.3.1 K. pneumoniae基因组的提取 | 第61页 |
| 4.3.2 目的基因puuC的克隆 | 第61-62页 |
| 4.3.3 质粒pET-puuC的构建 | 第62页 |
| 4.3.4 质粒pET-puuC的鉴定 | 第62-63页 |
| 4.3.5 目的片段Pntac的合成 | 第63页 |
| 4.3.6 重组质粒pETPntac-puuC的构建 | 第63-64页 |
| 4.3.7 重组质粒pETPntac-puuC的鉴定 | 第64页 |
| 4.3.8 K.pneumoniae感受态细胞制备及电转化 | 第64页 |
| 4.3.9 重组菌K p(pETPntac-puuC)的筛选与鉴定 | 第64页 |
| 4.3.10 重组菌微氧摇瓶发酵 | 第64-65页 |
| 4.3.11 重组菌微氧批式流加发酵 | 第65页 |
| 4.3.12 重组菌生长曲线绘制 | 第65页 |
| 4.3.13 甘油剩余量的测定 | 第65页 |
| 4.3.14 重组菌3-HP及副产物产量 | 第65页 |
| 4.3.15 重组菌酶活测定 | 第65-66页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第66-74页 |
| 4.4.1 目的基因puuC的克隆 | 第66页 |
| 4.4.2 质粒pET-puuC的鉴定 | 第66-67页 |
| 4.4.3 重组质粒pETPncore-tac-puuC的测序鉴定 | 第67页 |
| 4.4.4 重组菌K. pneumoniae(pETPncore-tac-puuC)鉴定 | 第67-68页 |
| 4.4.5 重组菌微氧摇瓶发酵产3-HP | 第68-71页 |
| 4.4.6 重组菌酶活测定 | 第71-72页 |
| 4.4.7 重组菌上罐发酵 | 第72-74页 |
| 4.5 本章小结 | 第74-76页 |
| 第五章 总结与建议 | 第76-80页 |
| 5.1 结论 | 第76-77页 |
| 5.2 创新点 | 第77页 |
| 5.3 问题与建议 | 第77-80页 |
| 参考文献 | 第80-86页 |
| 附录1. 本研究用到的试剂 | 第86-88页 |
| 附录2 本研究所用到的仪器 | 第88-90页 |
| 附录3 本研究所用到的引物 | 第90-92页 |
| 致谢 | 第92-94页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第94-96页 |
| 作者和导师简介 | 第96-97页 |
| 附件 | 第97-98页 |
