| 中文摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 缩略词表 | 第10-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-19页 |
| 1.1 鹅肥肝研究进展 | 第12-13页 |
| 1.2 miRNA概况 | 第13-15页 |
| 1.2.1 miRNA的生成 | 第13-14页 |
| 1.2.2 miRNA的作用机制 | 第14页 |
| 1.2.3 miRNA与肝脏脂代谢 | 第14-15页 |
| 1.3 miR-29c的研究概况 | 第15页 |
| 1.4 miRNA的研究技术 | 第15-18页 |
| 1.4.1 miRNA的克隆与高通量测序 | 第15-16页 |
| 1.4.2 miRNA的表达 | 第16-17页 |
| 1.4.3 miRNA的靶基因预测及验证 | 第17-18页 |
| 1.5 实验目的、意义及主要研究内容 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-25页 |
| 2.1.1 实验动物及饲养管理 | 第19页 |
| 2.1.2 朗德鹅胚胎的孵化 | 第19页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第19-20页 |
| 2.1.4 常用实验试剂及试剂盒 | 第20-21页 |
| 2.1.5 主要相关试剂的配制 | 第21-23页 |
| 2.1.6 实验所需引物设计 | 第23-25页 |
| 2.2 实验方法及步骤 | 第25-40页 |
| 2.2.1 总RNA提取前的准备 | 第25页 |
| 2.2.2 总RNA的提取 | 第25-26页 |
| 2.2.3 miRNA反转录 | 第26页 |
| 2.2.4 miRNA的荧光定量PCR | 第26-27页 |
| 2.2.5 靶基因预测 | 第27-28页 |
| 2.2.6 总RNA反转录为cDNA | 第28-29页 |
| 2.2.7 荧光定量PCR(qRT-PCR) | 第29页 |
| 2.2.8 鹅血细胞基因组DNA提取 | 第29-30页 |
| 2.2.9 pMIR-REPORT和PhRL-TK载体质粒扩繁 | 第30页 |
| 2.2.10 载体质粒回收 | 第30-31页 |
| 2.2.11 miRNA靶基因的靶位点PCR | 第31-32页 |
| 2.2.12 PCR产物检测 | 第32页 |
| 2.2.13 PCR产物的切胶回收 | 第32页 |
| 2.2.14 目的片段和载体双酶切及回收 | 第32-33页 |
| 2.2.15 酶切产物连接 | 第33页 |
| 2.2.16 转化及阳性克隆菌鉴定 | 第33-34页 |
| 2.2.17 序列分析 | 第34页 |
| 2.2.18 转染用质粒的提取 | 第34页 |
| 2.2.19 CHO细胞复苏、培养 | 第34-35页 |
| 2.2.20 CHO细胞转染 | 第35页 |
| 2.2.21 双荧光素酶活性检测 | 第35-36页 |
| 2.2.22 鹅原代肝细胞的分离与培养 | 第36-37页 |
| 2.2.23 转染miR-29c mimics或inhibitor | 第37页 |
| 2.2.24 细胞RNA提取 | 第37-38页 |
| 2.2.25 RNA反转录及荧光定量检测 | 第38页 |
| 2.2.26 葡萄糖、胰岛素、脂肪酸、维甲酸分别处理鹅原代肝细胞 | 第38页 |
| 2.2.27 细胞RNA提取、miRNA反转录以及miRNA定量检测 | 第38页 |
| 2.2.28 转染miR-29c inhibitor并进行葡萄糖处理 | 第38-39页 |
| 2.2.29 细胞RNA提取、反转录以及定量检测 | 第39页 |
| 2.2.30 鹅miRNA上游序列PCR扩增 | 第39页 |
| 2.2.31 PCR产物回收、连接、转化及阳性克隆菌鉴定 | 第39页 |
| 2.2.32 序列比对分析 | 第39页 |
| 2.2.33 miR-29c上游转录因子软件预测 | 第39页 |
| 2.2.34 数据分析 | 第39-40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-50页 |
| 3.1 填肥对鹅脂肪代谢相关组织中miR-29c表达的影响 | 第40页 |
| 3.2 miR-29c的靶基因预测、筛选与验证 | 第40-43页 |
| 3.2.1 miR-29c的靶基因预测 | 第40-41页 |
| 3.2.2 miR-29c的候选靶基因在朗德鹅肥肝中的表达 | 第41-42页 |
| 3.2.3 靶序列区扩增以及载体构建 | 第42-43页 |
| 3.2.4 双荧光报告系统对miR-29c靶基因的验证 | 第43页 |
| 3.3 miR-29c过表达或抑制后对鹅肝细胞中靶基因影响 | 第43-45页 |
| 3.4 脂肪肝形成相关因子对鹅原代肝细胞中miR-29c表达的影响 | 第45-47页 |
| 3.5 miR-29c介导葡萄糖对鹅肝细胞中靶基因INSIG1、COL3A1的调控 | 第47-48页 |
| 3.6 调控鹅miR-29c表达的转录因子预测及初步验证 | 第48-50页 |
| 4 讨论 | 第50-54页 |
| 4.1 填肥对鹅脂肪代谢相关组织中miR-29c表达的影响 | 第50页 |
| 4.2 朗德鹅miR-29c的靶基因预测与筛选 | 第50-51页 |
| 4.3 朗德鹅miR-29c的靶基因验证 | 第51页 |
| 4.4 miR-29c过表达或抑制后对鹅肝细胞中靶基因影响 | 第51-52页 |
| 4.5 脂肪肝形成相关因子对鹅原代肝细胞中miR-29c表达的影响 | 第52页 |
| 4.6 miR-29c介导葡萄糖对鹅肝细胞中靶基因INSIG1、COL3A1的调控 | 第52-53页 |
| 4.7 调控鹅miR-29c表达的转录因子预测及初步验证 | 第53-54页 |
| 5 全文结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文目录 | 第63-64页 |
