| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第9-18页 |
| 1.1 泸型酒及其生产工艺概述 | 第9-10页 |
| 1.2 泸型酒风味组成 | 第10-11页 |
| 1.3 泸型酒窖内微生物群落研究现状 | 第11-12页 |
| 1.4 丁酸菌研究现状 | 第12-13页 |
| 1.5 常用分子生态学研究方法 | 第13-16页 |
| 1.6 常用生物信息学软件及多元统计分析 | 第16-17页 |
| 1.7 立题意义 | 第17页 |
| 1.8 本课题研究内容 | 第17-18页 |
| 第二章 材料与方法 | 第18-28页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-20页 |
| 2.1.1 酒醅、窖泥样品 | 第18页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第18-19页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第19页 |
| 2.1.4 培养基 | 第19-20页 |
| 2.2 实验方法 | 第20-28页 |
| 2.2.1 环境样品宏基因组提取 | 第20页 |
| 2.2.2 丁酸合成途径关键基因克隆文库构建 | 第20-22页 |
| 2.2.2.1 引物设计 | 第20页 |
| 2.2.2.2 丁酸合成途径关键基因扩增 | 第20-21页 |
| 2.2.2.3 大肠杆菌JM109感受态制备（氯化钙法） | 第21页 |
| 2.2.2.4 连接与转化 | 第21页 |
| 2.2.2.5 测序数据处理 | 第21-22页 |
| 2.2.3 依据 16S rRNA基因测序结果预测丁酸菌组成 | 第22-23页 |
| 2.2.3.1 16S rRNA基因V1~V3区片段扩增 | 第22页 |
| 2.2.3.2 高通量测序数据基本处理 | 第22页 |
| 2.2.3.3 各分类学单元的PICRUSt功能预测 | 第22页 |
| 2.2.3.4 依据功能预测结果分析丁酸菌组成 | 第22-23页 |
| 2.2.3.5 丁酸菌组成与环境因子变化相关性分析 | 第23页 |
| 2.2.4 DGGE分析窖泥中梭菌（Clostridia）变化规律 | 第23-25页 |
| 2.2.4.1 梭菌 16S rRNA基因V4~V5区片段扩增 | 第23页 |
| 2.2.4.2 溶液配制 | 第23-24页 |
| 2.2.4.3 变性胶灌制及电泳 | 第24页 |
| 2.2.4.4 DGGE条带分析 | 第24-25页 |
| 2.2.5 高通量测序分析酒醅中梭菌群落变化规律及功能组成 | 第25页 |
| 2.2.6 实时荧光定量PCR表征梭菌生物量变化 | 第25-26页 |
| 2.2.6.1 标准样品制备 | 第25-26页 |
| 2.2.6.2 实时荧光定量PCR | 第26页 |
| 2.2.6.3 数据处理 | 第26页 |
| 2.2.7 部分产丁酸梭菌分离及代谢特性研究 | 第26-28页 |
| 2.2.7.1 菌株分离及鉴定 | 第26-27页 |
| 2.2.7.2 发酵产物检测 | 第27页 |
| 2.2.7.3 实时荧光定量PCR检测C. kluyveri生物量变化 | 第27-28页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第28-51页 |
| 3.1 酒醅中丁酸菌分布 | 第28-41页 |
| 3.1.1 克隆文库分析酒醅中的丁酸菌分布 | 第28-30页 |
| 3.1.2 PICRUSt预测丁酸代谢途径相关基因分布 | 第30-33页 |
| 3.1.3 酒醅中梭菌群落结构及动态变化 | 第33-39页 |
| 3.1.4 酒醅中梭菌功能预测 | 第39-41页 |
| 3.2 窖泥中丁酸菌分布 | 第41-46页 |
| 3.2.1 克隆文库分析窖泥中的丁酸菌分布 | 第41-44页 |
| 3.2.2 窖泥中梭菌群落结构及动态变化 | 第44-46页 |
| 3.3 窖池中丁酸、己酸产生菌的纯培养 | 第46-51页 |
| 3.3.1 窖泥丁酸、己酸产生菌的分离及发酵产物检测 | 第46-49页 |
| 3.3.2 窖池中的C. kluyveri生物量变化 | 第49-51页 |
| 主要结论与展望 | 第51-53页 |
| 主要结论 | 第51-52页 |
| 问题与展望 | 第52-53页 |
| 致谢 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第60页 |
