| 符号说明 | 第4-11页 |
| 中文摘要 | 第11-13页 |
| Abstract | 第13-15页 |
| 1 前言 | 第16-31页 |
| 1.1 马立克氏病(MD)的研究进展 | 第16-20页 |
| 1.1.1 病原学 | 第16-17页 |
| 1.1.2 流行病学 | 第17页 |
| 1.1.3 感染机制及病理变化 | 第17-18页 |
| 1.1.3.1 病毒溶细胞性感染期 | 第17-18页 |
| 1.1.3.2 潜伏感染期 | 第18页 |
| 1.1.3.3 二次溶细胞感染 | 第18页 |
| 1.1.3.4 转化和肿瘤的形成 | 第18页 |
| 1.1.4 诊断技术 | 第18-19页 |
| 1.1.4.1 常规诊断 | 第18-19页 |
| 1.1.4.2 病毒分离 | 第19页 |
| 1.1.4.3 病毒抗原的检测 | 第19页 |
| 1.1.4.4 聚合酶链式反应技术(PCR) | 第19页 |
| 1.1.4.5 DNA探针技术 | 第19页 |
| 1.1.5 MD致病型 | 第19-20页 |
| 1.2 MDV分子生物学研究进展 | 第20-24页 |
| 1.2.1 MDV基因组结构 | 第20-22页 |
| 1.2.2 MDV结构蛋白及相关基因 | 第22-24页 |
| 1.2.2.1 致瘤基因 | 第22-23页 |
| 1.2.2.2 糖蛋白基因 | 第23-24页 |
| 1.2.2.3 其他基因 | 第24页 |
| 1.3 禽反转录病毒与MDV间的基因重组 | 第24-25页 |
| 1.3.1 病毒的变异 | 第24页 |
| 1.3.2 MDV与REV间的基因重组 | 第24-25页 |
| 1.3.3 REV与MDV基因重组的机制 | 第25页 |
| 1.3.4 不同病毒间遗传重组流行病学意义 | 第25页 |
| 1.4 DNA片段克隆的载体系统 | 第25-28页 |
| 1.4.1 质粒 | 第25-26页 |
| 1.4.2 粘粒 | 第26页 |
| 1.4.3 BAC的发展及其优势 | 第26-28页 |
| 1.4.3.1 细菌人工染色体载体系统(BAC) | 第26-27页 |
| 1.4.3.2 利用BAC构建MDV感染性克隆 | 第27-28页 |
| 1.4.3.3 基于MDV BAC感染性克隆的同源重组技术 | 第28页 |
| 1.5 MD的防制 | 第28-29页 |
| 1.5.1 免疫机理 | 第28-29页 |
| 1.5.2 疫苗研究进展 | 第29页 |
| 1.5.3 目前MDV疫苗的种类 | 第29页 |
| 1.5.3.1 常规致弱疫苗 | 第29页 |
| 1.5.3.2 新型疫苗 | 第29页 |
| 1.6 本研究的目的及意义 | 第29-31页 |
| 2 材料和方法 | 第31-44页 |
| 2.1 主要试验耗材和仪器 | 第31-32页 |
| 2.1.1 分子克隆相关试剂 | 第31页 |
| 2.1.2 常规细胞培养相关试剂 | 第31页 |
| 2.1.3 其他主要试剂 | 第31页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第31页 |
| 2.1.5 相关菌种、病毒株及载体 | 第31-32页 |
| 2.2 SC9-1重组病毒的拯救及鉴定 | 第32-35页 |
| 2.2.1 SC9-1重组病毒的拯救 | 第32页 |
| 2.2.2 SC9-1重组病毒的IFA鉴定 | 第32页 |
| 2.2.3 SC9-1重组病毒在细胞上的传代以及BAC序列的PCR检测 | 第32-33页 |
| 2.2.3.1 SC9-1重组病毒在细胞上的传代 | 第32页 |
| 2.2.3.2 SC9-1重组病毒BAC序列的PCR检测 | 第32-33页 |
| 2.2.4 不同代次病毒DNA中的BAC序列的荧光定量PCR检测 | 第33-34页 |
| 2.2.5 SC9-1基因组BAC序列敲除的PCR鉴定 | 第34-35页 |
| 2.2.5.1 引物设计 | 第34页 |
| 2.2.5.2 残留碱基的PCR扩增 | 第34页 |
| 2.2.5.3 PCR产物电泳及分子克隆 | 第34-35页 |
| 2.3 马立克氏病毒疫苗株SC9-2在CEF细胞上的传代致弱及其免疫抑制作用和保护效果的评估 | 第35-37页 |
| 2.3.1 SC9-2疫苗株在CEF细胞上的传代致弱 | 第35-36页 |
| 2.3.2 不同代次SC9-2对SPF鸡免疫抑制和免疫保护效果的评估 | 第36页 |
| 2.3.2.1 不同代次SC9-2外源病毒检测 | 第36页 |
| 2.3.2.2 SC9-2/10~(th)和SC9-2/40~(th)对SPF鸡免疫抑制和免疫保护的评估 | 第36页 |
| 2.3.3 SC9-2在鸡体内复制动力学 | 第36-37页 |
| 2.4 表达NDV-F基因重组MDV的构建及其在鸡体内外的复制 | 第37-44页 |
| 2.4.1 原理 | 第37-38页 |
| 2.4.2 NDV-F表达盒的构建及IFA验证 | 第38-39页 |
| 2.4.2.1 NDV-F表达盒的构建 | 第38-39页 |
| 2.4.2.2 NDV-F表达盒的IFA验证 | 第39页 |
| 2.4.3 Red E/T和FLP/FRT重组系统构建重组病毒 | 第39-42页 |
| 2.4.3.1 重组表达盒的构建 | 第39页 |
| 2.4.3.2 重组串联表达盒与SC9-1在EL250中的电转重组 | 第39-40页 |
| 2.4.3.3 利用Flp/FRT重组系统敲除Kan+抗性筛选基因 | 第40-41页 |
| 2.4.3.4 大量提取重组阳性质粒 | 第41-42页 |
| 2.4.3.5 重组病毒的拯救 | 第42页 |
| 2.4.3.6 rMDV-F的生物学活性检测 | 第42页 |
| 2.4.4 重组病毒在体外的生长复制 | 第42页 |
| 2.4.5 重组病毒在鸡体内的复制 | 第42-44页 |
| 3 结果与分析 | 第44-53页 |
| 3.1 SC9-1重组病毒的拯救与鉴定 | 第44-46页 |
| 3.1.1 SC9-1重组病毒的拯救及鉴定结果 | 第44页 |
| 3.1.2 不同代次SC9-1重组病毒BAC序列的PCR检测结果 | 第44-45页 |
| 3.1.3 病毒DNA中的BAC序列的荧光定量PCR检测结果 | 第45页 |
| 3.1.4 SC9-1 BAC序列敲除的PCR鉴定结果 | 第45-46页 |
| 3.2 马立克氏病毒疫苗株SC9-2在CEF细胞上的传代致弱及免疫抑制和免疫保护效果的评估 | 第46-49页 |
| 3.2.1 SC9-2(40~(th)和10~(th))外源病毒检测 | 第46-47页 |
| 3.2.2 SC9-2(40~(th)和10~(th))弱毒株对SPF鸡的致病性 | 第47页 |
| 3.2.3 SC9-2(40~(th)和10~(th))弱毒株对SPF鸡体重及免疫器官的影响 | 第47页 |
| 3.2.4 免疫SC9-2弱毒苗SPF鸡体对NDV和AIV-H9的抗体反应 | 第47-48页 |
| 3.2.5 SC9-2在鸡体内的复制动力学 | 第48页 |
| 3.2.6 SC9-2(40~(th)和10~(th))对SPF鸡的免疫保护效果 | 第48-49页 |
| 3.3 表达NDV-F基因重组马立克病病毒的构建及其在鸡体内外的复制 | 第49-53页 |
| 3.3.1 IFA验证R-CMV-F质粒在体外的表达 | 第49页 |
| 3.3.2 重组马立克病病毒的分子结构及鉴定 | 第49-50页 |
| 3.3.3 感染重组病毒rMDV-F细胞中NDV-F蛋白的检测 | 第50-51页 |
| 3.3.4 重组病毒在体外的生长复制 | 第51页 |
| 3.3.5 重组病毒在鸡体内的复制 | 第51-53页 |
| 4 讨论 | 第53-57页 |
| 5 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第66页 |
