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定向进化提高Klebsiella pneumoniae木糖耐性及调控机理

摘要第4-5页
ABSTRACT第5-6页
1 前言第9-22页
    1.1 2,3-丁二醇第9-11页
        1.1.1 2,3-丁二醇理化性质第9页
        1.1.2 2,3丁二醇旋光异构体的形成机制第9页
        1.1.3 2,3-丁二醇的用途第9-11页
    1.2 生物法生产2,3-丁二醇第11-14页
        1.2.1 菌种第11-13页
        1.2.2 原料第13-14页
    1.3 木糖发酵生产2,3-丁二醇的研究进展第14-18页
        1.3.1 微生物生产2,3-丁二醇的代谢途径第14-17页
        1.3.2 现阶段利用木糖生产2,3-丁二醇的研究进展第17-18页
    1.4 提高菌种耐受性的研究第18-21页
        1.4.1 定向进化工程第18-19页
        1.4.2 全局转录调控工程第19-21页
    1.5 研究意义和内容第21-22页
        1.5.1 研究意义第21页
        1.5.2 研究内容第21-22页
2 材料与方法第22-39页
    2.1 实验材料第22-26页
        2.1.1 实验菌株和质粒第22页
        2.1.2 主要试剂第22-23页
        2.1.3 主要仪器第23页
        2.1.4 主要培养基第23-24页
        2.1.5 主要溶液第24页
        2.1.6 引物第24-26页
    2.2 实验方法第26-39页
        2.2.1 质粒的构建第26-31页
        2.2.2 菌株的构建第31-32页
        2.2.3 RT-PCR的方法第32-35页
        2.2.4 种子培养第35页
        2.2.5 发酵培养第35页
        2.2.6 菌体浓度的测定第35-36页
        2.2.7 生长曲线的绘制第36页
        2.2.8 高效液相色谱分析方法第36页
        2.2.9 压力诱导突变的方法第36-38页
        2.2.10 易错PCR的方法第38-39页
3 结果与讨论第39-67页
    3.1 木糖浓度耐受性确定第39-40页
    3.2 Sigma因子编码基因rpoD表达量变化对菌株利用木糖的影响第40-49页
        3.2.1 重组菌株KP-18-rpoD、KP-7-rpoD的构建与验证第40-42页
        3.2.2 KP-18-rpoD、KP-7-rpoD与出发菌株生长速度的比较第42-43页
        3.2.3 KP-18-rpoD、KP-7-rpoD与出发菌株rpoD基因表达量的比较第43-45页
        3.2.4 KP-18-rpoD、KP-7-rpoD与出发菌株木糖消耗速率的比较第45-46页
        3.2.5 KP-18-rpoD、KP-7-rpoD与出发菌株2,3-丁二醇及副产物产量比较第46-49页
    3.3 Sigma因子编码基因rpoD突变型及定向进化菌株的筛选第49-53页
        3.3.1 rpoD突变质粒文库的构建第49-53页
        3.3.2 rpoD突变菌株文库的构建和优异表型的筛选第53页
    3.4 Sigma因子不同突变型和定向进化菌株的对比及转录组学分析第53-67页
        3.4.1 KP2、KPC与出发菌株木糖消耗速率的比较第53-54页
        3.4.2 KP2、KPC与出发菌株2,3-丁二醇及副产物产量的比较第54-57页
        3.4.3 KP2、KPC与出发菌株转录组学分析比较第57-67页
4 结论第67-68页
5 展望第68-69页
6 参考文献第69-78页
7 攻读硕士学位期间发表论文及专利情况第78-79页
8 致谢第79页

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