| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 缩略词 | 第9-11页 |
| 目录 | 第11-16页 |
| 第一部分 文献综述 | 第16-32页 |
| 第一章 含硫化合物在生命活动中的功能 | 第17-22页 |
| 1 谷胱甘肽 | 第17-18页 |
| 2 铁硫簇 | 第18-19页 |
| 3 硫辛酸 | 第19-20页 |
| 4 生物素 | 第20-21页 |
| 5 硫胺素 | 第21-22页 |
| 第二章 硫酸盐活化酶复合体的分类及其功能 | 第22-30页 |
| 1 硫酸盐活化复合体的分类 | 第23-27页 |
| ·GTPase型SAC | 第23-24页 |
| ·APSK型SAC | 第24-26页 |
| ·APSR型SAC | 第26-27页 |
| 2 硫酸盐活化相关基因的融合 | 第27-28页 |
| 3 现状与展望 | 第28-30页 |
| 第三章 本课题的研究目的及意义 | 第30-32页 |
| 第二部分 研究内容 | 第32-74页 |
| 第一章 球形红细菌硫酸盐活化酶复合体的寡聚化 | 第32-50页 |
| 1 前言 | 第32-33页 |
| 2 材料与方法 | 第33-42页 |
| ·酶与生化试剂 | 第33页 |
| ·菌株与载体 | 第33页 |
| ·球形红细菌SAC定点突变 | 第33-35页 |
| ·突变位点的确定与突变引物设计 | 第33-34页 |
| ·PCR扩增条件及电泳检测 | 第34页 |
| ·PCR产物的处理与纯化 | 第34页 |
| ·E.coli DH5α感受态细胞的制备 | 第34-35页 |
| ·PCR产物的转化 | 第35页 |
| ·测序 | 第35页 |
| ·质粒提取 | 第35-36页 |
| ·蛋白表达菌株E coli BL21(DE3)的感受态细胞的制备及转化 | 第36页 |
| ·球形红细菌SAC及其突变体蛋白的表达与纯化 | 第36-38页 |
| ·球形红细菌SAC及其突变体蛋白的诱导表达 | 第36-37页 |
| ·透析袋预处理 | 第37页 |
| ·球形红细菌SAC及其突变体蛋白的纯化 | 第37-38页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 | 第38-39页 |
| ·制胶 | 第38-39页 |
| ·上样 | 第39页 |
| ·电泳 | 第39页 |
| ·染色 | 第39页 |
| ·脱色 | 第39页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第39-40页 |
| ·试剂配制 | 第39页 |
| ·标准曲线的制作 | 第39页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第39-40页 |
| ·球形红细菌SAC突变蛋白酶活性测定 | 第40-41页 |
| ·ATPS活性测定 | 第40-41页 |
| ·APSK活性测定 | 第41页 |
| ·球形红细菌SAC及其突变蛋白分子量的测定 | 第41-42页 |
| ·标准曲线的制作 | 第41-42页 |
| ·蛋白样品分子量的测定 | 第42页 |
| 3 实验结果 | 第42-49页 |
| ·突变引物设计 | 第42-43页 |
| ·PCR结果检测 | 第43页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测蛋白的诱导表达及纯化 | 第43-44页 |
| ·蛋白定量 | 第44-46页 |
| ·球形红细菌SAC突变蛋白酶活性测定 | 第46-47页 |
| ·球形红细菌SAC及其突变蛋白分子量的计算 | 第47-49页 |
| 4 讨论 | 第49-50页 |
| 第二章 通道中带电荷氨基酸在APS通道过程中的作用 | 第50-58页 |
| 1 前言 | 第50页 |
| 2 材料与方法 | 第50-51页 |
| ·酶与生化试剂 | 第50页 |
| ·菌株与载体 | 第50页 |
| ·KD环与通道中带电荷氨基酸的定点突变 | 第50-51页 |
| ·突变位点的确定及引物设计 | 第50-51页 |
| ·PCR扩增及电泳检测 | 第51页 |
| ·PCR产物的转化与测序 | 第51页 |
| ·质粒提取与转化 | 第51页 |
| ·蛋白的表达与纯化 | 第51页 |
| ·SDS-聚丙烯凝胶电泳检测及蛋白质浓度测定 | 第51页 |
| ·突变蛋白活性测定 | 第51页 |
| 3 实验结果 | 第51-56页 |
| ·突变位点的选择与引物设计 | 第51-54页 |
| ·突变蛋白酶活性的分析 | 第54-56页 |
| 4 讨论 | 第56-58页 |
| 第三章 球形红细菌SAC磷酸化APS的机制 | 第58-65页 |
| 1 前言 | 第58-59页 |
| 2 材料与方法 | 第59-61页 |
| ·酶与生化试剂 | 第59页 |
| ·菌株与载体 | 第59页 |
| ·APSK活性位点定点突变 | 第59-60页 |
| ·定点突变位点的选择及引物设计 | 第59-60页 |
| ·PCR扩增与突变位点的检测 | 第60页 |
| ·蛋白的表达与纯化及浓度测定 | 第60页 |
| ·酶活性测定 | 第60页 |
| ·Western杂交分析 | 第60-61页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第60页 |
| ·转膜 | 第60-61页 |
| ·封闭 | 第61页 |
| ·一抗孵育 | 第61页 |
| ·二抗孵育 | 第61页 |
| ·显色反应 | 第61页 |
| 3 实验结果 | 第61-63页 |
| ·突变位点的选择与突变引物设计 | 第61-62页 |
| ·突变蛋白活性测定 | 第62页 |
| ·Western杂交检测突变蛋白磷酸化 | 第62-63页 |
| 4 讨论 | 第63-65页 |
| 第四章 活性测定相关酶的纯化及活性测定 | 第65-74页 |
| 1 前言 | 第65页 |
| 2 材料与方法 | 第65-68页 |
| ·酶与生化试剂 | 第65页 |
| ·菌株与载体 | 第65-66页 |
| ·表达载体的转化与蛋白的诱导表达 | 第66页 |
| ·大肠杆菌与球形红细菌焦磷酸酶的纯化 | 第66页 |
| ·酵母APSK的纯化 | 第66页 |
| ·酵母HAL_2核苷酸酶的纯化 | 第66-67页 |
| ·大肠杆菌与球形红细菌焦磷酸酶活性测定 | 第67页 |
| ·磷酸标准曲线的制备 | 第67页 |
| ·大肠杆菌焦磷酸酶活性测定 | 第67页 |
| ·球形红细菌焦磷酸酶活性测定 | 第67页 |
| ·酵母APSK活性测定 | 第67页 |
| ·酵母HAL_2核苷酸酶活性测定 | 第67-68页 |
| 3 实验结果 | 第68-72页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测蛋白的诱导表达及纯化 | 第68-71页 |
| ·大肠杆菌与球形红细菌焦磷酸酶活性分析 | 第71-72页 |
| ·酵母APSK与HAL_2核苷酸酶活性分析 | 第72页 |
| 4 讨论 | 第72-74页 |
| 结论与展望 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-82页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
