| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 1 文献综述 | 第9-13页 |
| ·蛋白酶的综述 | 第9页 |
| ·蛋白酶分类 | 第9-10页 |
| ·序列特异性蛋白酶 | 第9页 |
| ·立体构象特异性蛋白酶 | 第9-10页 |
| ·体构象特异性蛋白酶 | 第10页 |
| ·蛋白酶抑制剂 | 第10页 |
| ·蛋白重组及融合标签的应用 | 第10-11页 |
| ·常用蛋白酶底物研究进展 | 第11-13页 |
| 2 引言 | 第13-14页 |
| ·研究目的意义 | 第13页 |
| ·研究内容 | 第13-14页 |
| 3 材料与方法 | 第14-24页 |
| ·材料 | 第14-15页 |
| ·菌株来源 | 第14页 |
| ·质粒来源 | 第14页 |
| ·基因来源 | 第14页 |
| ·主要试剂 | 第14页 |
| ·部分缓冲液的配制 | 第14-15页 |
| ·本研究中设计的引物 | 第15页 |
| ·仪器和设备 | 第15-16页 |
| ·方法 | 第16-24页 |
| ·克隆不同物种DAL的编码基因 | 第16-17页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第17-19页 |
| ·不同标签的两种DAL原核表达载体构建 | 第17页 |
| ·含不同蛋白酶序列的原核表达载体构建 | 第17-18页 |
| ·含内含肽的原核表达载体构建 | 第18-19页 |
| ·含SUMO标签及表达Ulp1的原核表达载体构建 | 第19页 |
| ·重组蛋白的表达 | 第19页 |
| ·小量蛋白的表达 | 第19页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第19-21页 |
| ·带有His标签的蛋白纯化 | 第19-20页 |
| ·带有GST标签的蛋白纯化 | 第20页 |
| ·带有MBP标签的蛋白纯化 | 第20-21页 |
| ·蛋白分析 | 第21-22页 |
| ·Bradford法检测蛋白浓度 | 第21页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第21页 |
| ·Western blot分析 | 第21-22页 |
| ·不同蛋白酶切条件及时间 | 第22-23页 |
| ·DAL酶活性分析 | 第23-24页 |
| 4 结果与分析 | 第24-34页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第24-25页 |
| ·融合标签对eDAL、sDAL的表达量和活性的影响 | 第25-26页 |
| ·蛋白酶裂解序列对融合蛋白eDAL的表达量和活性的影响 | 第26-28页 |
| ·蛋白酶激活剂抑制剂对DAL活性的耐受性分析 | 第28页 |
| ·耦联分析eDAL融合蛋白对序列特异性蛋白酶的影响 | 第28-29页 |
| ·DAL融合蛋白作为底物分析凝血酶和肠激酶的裂解效应分析 | 第29-31页 |
| ·eDAL融合蛋白作为底物分析内含肽自裂解效应分析 | 第31-32页 |
| ·Ulp1胞内胞外作用底物活性研究 | 第32-34页 |
| 5 讨论 | 第34-36页 |
| ·融合蛋白酶底物的研究 | 第34页 |
| ·融合标签对蛋白表达的影响 | 第34页 |
| ·DAL酶学性质研究和功能应用 | 第34页 |
| ·DAL融合系统的应用 | 第34-36页 |
| 6 结论 | 第36-37页 |
| 参考文献 | 第37-44页 |
| 致谢 | 第44-45页 |
| 个人简介 | 第45页 |
