| 摘要 | 第1-14页 |
| ABSTRACT | 第14-19页 |
| 符号及缩略语 | 第19-22页 |
| 前言 | 第22-24页 |
| 第一部分 文献综述 | 第24-52页 |
| 第一章 哺乳动物卵母细胞成熟与早期胚胎发育 | 第24-38页 |
| 1 卵母细胞成熟与早期胚胎发育的一般规律 | 第24-28页 |
| ·卵母细胞减数分裂成熟 | 第24-26页 |
| ·早期胚胎发育 | 第26-28页 |
| 2 卵母细胞成熟的重要事件与判定标准 | 第28-29页 |
| ·卵母细胞成熟的重要事件 | 第28页 |
| ·卵母细胞成熟的判定标准 | 第28-29页 |
| 3 影响卵母细胞体外成熟和早期胚胎发育的因素 | 第29-33页 |
| ·影响卵母细胞体外成熟的因素 | 第29-32页 |
| ·卵母细胞成熟和早期胚胎发育的分子结构基础 | 第32-33页 |
| 4 卵母细胞减数分裂的重要细胞学变化 | 第33-38页 |
| ·纺锤体向皮质部迁移与定位 | 第33-34页 |
| ·皮质重组、极体形成与卵母细胞极化 | 第34-35页 |
| ·染色体分离 | 第35-38页 |
| 第二章 卵母细胞减数分裂与早期胚胎发育的分子调控研究进展 | 第38-52页 |
| 1 纺锤体迁移和定位的分子机制 | 第38-41页 |
| ·微丝 | 第38-39页 |
| ·高尔基体 | 第39-40页 |
| ·肌球蛋白 | 第40页 |
| ·MLCK | 第40-41页 |
| 2 皮质重组的分子调控机制 | 第41-43页 |
| ·肌动球蛋白 | 第41页 |
| ·染色体 | 第41-42页 |
| ·Small GTPase | 第42-43页 |
| ·Src蛋白酪氨酸激酶 | 第43页 |
| 3 染色体分离的分子调节机制 | 第43-49页 |
| ·着丝点和着丝点蛋白 | 第43-44页 |
| ·染色体乘客复合物 | 第44-45页 |
| ·纺锤体组装检查点 | 第45-47页 |
| ·黏连蛋白 | 第47-48页 |
| ·后期促进复合体 | 第48-49页 |
| 4 PAR蛋白 | 第49-50页 |
| 5 结语 | 第50-52页 |
| 第二部分 试验研究 | 第52-152页 |
| 第三章 KIF20A调控猪卵母细胞减数分裂细胞周期的研究 | 第52-68页 |
| 1 试验材料 | 第53-57页 |
| ·抗体和试剂 | 第53-54页 |
| ·主要仪器设备 | 第54-55页 |
| ·抗体和试剂的配制 | 第55-57页 |
| 2 方法 | 第57-59页 |
| ·猪卵母细胞分离与成熟培养 | 第57页 |
| ·Paprotrain处理卵母细胞 | 第57-58页 |
| ·免疫荧光染色和激光共聚焦观察 | 第58-59页 |
| ·数据分析 | 第59页 |
| 3 结果 | 第59-64页 |
| ·KIF20A在猪卵母细胞减数成熟过程中的亚细胞定位 | 第59-60页 |
| ·KIF20A抑制导致猪卵母细胞成熟失败 | 第60-62页 |
| ·KIF20A抑制导致卵母细胞减数分裂细胞周期阻滞、pbI排出率降低 | 第62-63页 |
| ·KIF20A抑制不影响减数分裂纺锤体的形成与染色体排列 | 第63-64页 |
| 4 讨论 | 第64-66页 |
| ·KIF20A调控猪卵母细胞成熟 | 第64-65页 |
| ·KIF20A通过调控减数分裂细胞周期影响猪卵母细胞成熟 | 第65-66页 |
| 5 小结 | 第66-68页 |
| 第四章 KIF20A在猪早期胚胎的分布及其对卵裂的调控作用 | 第68-76页 |
| 1 试验材料 | 第68-70页 |
| ·抗体和试剂 | 第68-69页 |
| ·主要仪器设备 | 第69页 |
| ·抗体和试剂的配制 | 第69-70页 |
| 2 方法 | 第70-72页 |
| ·猪卵母细胞分离与成熟培养 | 第70页 |
| ·猪卵母细胞体外孤雌激活 | 第70-71页 |
| ·Paprotrain处理孤雌激活胚胎 | 第71页 |
| ·孤雌激活胚胎发育的评价 | 第71页 |
| ·免疫荧光染色和激光共聚焦观察 | 第71-72页 |
| ·数据分析 | 第72页 |
| 3 结果 | 第72-74页 |
| ·KIF20A在猪早期胚胎的亚细胞定位 | 第72-73页 |
| ·KIF20A抑制导致早期胚胎发育阻滞 | 第73-74页 |
| 4 讨论 | 第74-75页 |
| ·KIF20A特异性定位提示其在猪早期胚胎发育过程中起作用 | 第74页 |
| ·KIF20A调控猪早期胚胎卵裂 | 第74-75页 |
| 5 小结 | 第75-76页 |
| 第五章 Large GTPase Dynamin2调控猪卵母细胞成熟的第一极体排出 | 第76-98页 |
| 1 试验材料 | 第78-81页 |
| ·抗体和试剂 | 第78页 |
| ·主要仪器设备 | 第78-79页 |
| ·抗体和试剂的配制 | 第79-81页 |
| 2 方法 | 第81-86页 |
| ·猪卵母细胞分离与成熟培养 | 第81页 |
| ·dynasore处理卵母细胞 | 第81-82页 |
| ·荧光染色与激光共聚焦观察 | 第82-83页 |
| ·蛋白免疫印迹(western blot) | 第83-85页 |
| ·微丝荧光强度和免疫印迹蛋白强度分析 | 第85-86页 |
| ·数据分析 | 第86页 |
| 3 结果 | 第86-94页 |
| ·Dynamin2在猪卵母细胞成熟过程中的亚细胞定位 | 第86-88页 |
| ·Dynamin2抑制导致猪卵母细胞成熟障碍 | 第88-89页 |
| ·Dynamin2抑制导致猪卵母细胞减数分裂过程中微丝的组装障碍 | 第89-91页 |
| ·Dynamin2抑制导致猪卵母细胞纺锤体定位障碍 | 第91-93页 |
| ·Dynamin2抑制导致皮质部ARP2分布障碍 | 第93-94页 |
| 4 讨论 | 第94-96页 |
| ·Dynamin2的定位反映出它在卵母细胞成熟中的作用 | 第95页 |
| ·Dynamin2通过调节微丝依赖的纺锤体迁移影响pbI排出 | 第95-96页 |
| ·Dynamin2通过调控ARP2的表达和分布影响微丝组装 | 第96页 |
| 5 小结 | 第96-98页 |
| 第六章 Small GTPase RhoA在猪卵母细胞成熟过程中的表达与功能 | 第98-126页 |
| 1 试验材料 | 第99-100页 |
| ·抗体和试剂 | 第99页 |
| ·主要仪器设备 | 第99页 |
| ·抗体与和试剂配制 | 第99-100页 |
| 2 方法 | 第100-106页 |
| ·猪卵母细胞分离与培养 | 第100页 |
| ·Rhosin处理卵母细胞 | 第100-101页 |
| ·RhoA siRNA胞质注射 | 第101-103页 |
| ·荧光染色与激光共聚焦观察 | 第103-104页 |
| ·Western blot | 第104-106页 |
| ·荧光强度和免疫印迹蛋白强度分析 | 第106页 |
| ·数据分析 | 第106页 |
| 3 结果 | 第106-120页 |
| ·RhoA在猪卵母细胞减数分裂过程中的亚细胞定位 | 第106-108页 |
| ·RhoA抑制与敲低对猪卵母细胞减数分裂的影响 | 第108-111页 |
| ·RhoA抑制与敲低影响猪卵母细胞的微丝组装和纺锤体定位 | 第111-115页 |
| ·RhoA破坏影响ROCK、p-Cofilin和ARP2的表达 | 第115-118页 |
| ·RhoA抑制与敲低影响减数分裂纺锤体组装并降低MAPK的磷酸化 | 第118-120页 |
| 4 讨论 | 第120-124页 |
| ·RhoA在卵母细胞极体排出过程中发挥关键作用 | 第121-122页 |
| ·RhoA通过影响ROCK和ARP2表达及Cofilin磷酸化调控减数分裂过程中微丝依赖的纺锤体迁移 | 第122-123页 |
| ·RhoA通过调控MAPK的磷酸化水平影响猪卵母细胞减数分裂纺锤体的组装 | 第123-124页 |
| 5 小结 | 第124-126页 |
| 第七章 RhoA在猪早期胚胎发育过程中的表达与功能 | 第126-138页 |
| 1 试验材料 | 第127-128页 |
| ·抗体和试剂 | 第127页 |
| ·主要仪器设备 | 第127页 |
| ·抗体和试剂的配制 | 第127-128页 |
| 2 方法 | 第128-130页 |
| ·猪卵母细胞分离与成熟培养 | 第128页 |
| ·孤雌激活生产猪体外胚胎 | 第128页 |
| ·Rhosin处理孤雌激活胚胎 | 第128页 |
| ·孤雌激活胚胎染色体分离的评价 | 第128-129页 |
| ·免疫荧光染色和激光共聚焦观察 | 第129页 |
| ·数据分析 | 第129-130页 |
| 3 结果 | 第130-134页 |
| ·RhoA在猪胚胎发育过程中的亚细胞定位 | 第130-131页 |
| ·RhoA抑制影响猪早期胚胎发育 | 第131-132页 |
| ·RhoA影响早期胚胎的胞质分裂 | 第132-133页 |
| ·RhoA抑制导致早期胚胎微丝表达障碍 | 第133-134页 |
| 4 讨论 | 第134-135页 |
| ·RhoA在猪早期胚胎发育过程中发挥重要的调控作用 | 第134-135页 |
| ·RhoA通过调控微丝的组装调节猪早期胚胎的卵裂过程 | 第135页 |
| 5 小结 | 第135-138页 |
| 第八章 RhoA效应分子ROCK对猪卵母细胞成熟的调控 | 第138-152页 |
| 1 试验材料 | 第139-140页 |
| ·抗体和试剂 | 第139-140页 |
| ·主要仪器设备 | 第140页 |
| ·抗体和试剂的配制 | 第140页 |
| 2 方法 | 第140-142页 |
| ·猪卵母细胞分离与成熟培养 | 第140页 |
| ·Y-27632处理卵母细胞 | 第140-141页 |
| ·荧光染色与激光共聚焦观察 | 第141-142页 |
| ·微丝荧光强度分析 | 第142页 |
| ·数据分析 | 第142页 |
| 3 结果 | 第142-149页 |
| ·ROCK在猪卵母细胞减数分裂过程中的亚细胞定位 | 第142-144页 |
| ·Y-27632对猪卵母细胞成熟的影响 | 第144-145页 |
| ·Y-27632处理抑制猪卵母细胞微丝的组装 | 第145-147页 |
| ·ROCK影响减数分裂纺锤体的迁移和定位 | 第147-149页 |
| 4 讨论 | 第149-151页 |
| ·ROCK特异性定位提示其对卵母细胞减数分裂的调控作用 | 第149-150页 |
| ·ROCK调控猪卵母细胞减数分裂 | 第150页 |
| ·ROCK通过调控微丝依赖的纺锤体迁移影响减数分裂pbI排出 | 第150-151页 |
| 5 小结 | 第151-152页 |
| 全文结论 | 第152-154页 |
| 创新性 | 第154-156页 |
| 参考文献 | 第156-180页 |
| 附录1：研究结果汇总示意图 | 第180-181页 |
| 附录2：攻读博士学位期间论文发表情况 | 第181-183页 |
| 致谢 | 第183页 |
