| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-5页 |
| 插图及附表清单 | 第5-7页 |
| 缩略语中英文对照表 | 第7-13页 |
| 第一章 概述 | 第13-31页 |
| ·猪瘟概述 | 第13-14页 |
| ·猪瘟病毒分类及其基因组结构 | 第14-16页 |
| ·核衣壳蛋白C | 第14-15页 |
| ·结构蛋白Erns（E0） | 第15页 |
| ·结构蛋白E1 | 第15页 |
| ·结构蛋白E2 | 第15页 |
| ·P7 | 第15页 |
| ·NS2-3 蛋白 | 第15-16页 |
| ·NS4 | 第16页 |
| ·NS5 | 第16页 |
| ·猪瘟病毒的增殖及细胞培养 | 第16-17页 |
| ·猪瘟疫苗研究进展 | 第17-31页 |
| ·常规疫苗 | 第17-18页 |
| ·标记疫苗及血清学检测方法 | 第18-20页 |
| ·重组嵌合疫苗 | 第20-25页 |
| ·DNA疫苗 | 第25-26页 |
| ·亚单位疫苗 | 第26-28页 |
| ·多肽疫苗 | 第28-29页 |
| ·结论 | 第29-31页 |
| 第二章 前言 | 第31-35页 |
| ·研究目的和研究意义 | 第31页 |
| ·研究内容和技术路线 | 第31-32页 |
| ·E1插入片段的生物信息学分析 | 第31-32页 |
| ·含有FLAG短肽基因的嵌合病毒vC-FLAG感染性克隆的构建 | 第32页 |
| ·标记病毒与兔体反应之间的关系 | 第32页 |
| ·标记病毒在兔体上的传代 | 第32页 |
| ·FLAG抗体检测方法的建立 | 第32页 |
| ·技术路线 | 第32-35页 |
| ·本研究的主要技术路线 | 第32-34页 |
| ·含有FLAG基因的猪瘟兔化弱毒疫苗株全长构建思路 | 第34页 |
| ·FLAG标记的猪瘟兔化弱毒疫苗毒株的感染性克隆的构建策略 | 第34-35页 |
| 第三章 E1转座子二级结构分析及阳性标记分子的设计 | 第35-46页 |
| ·序列和方法 | 第35-36页 |
| ·RB-C22v转座子氨基酸序列 | 第35-36页 |
| ·方法 | 第36页 |
| ·转座子分析结果 | 第36-39页 |
| ·Pepinfo分析结果 | 第36-38页 |
| ·Garnier分析结果 | 第38页 |
| ·Tmap分析结果 | 第38-39页 |
| ·结论 | 第39页 |
| ·设计标记片段 | 第39-43页 |
| ·Pepinfo分析结果 | 第40-42页 |
| ·Garnier分析结果 | 第42页 |
| ·Tmap分析结果 | 第42-43页 |
| ·结论 | 第43页 |
| ·讨论 | 第43-44页 |
| ·小结 | 第44-46页 |
| 第四章 猪瘟兔化弱毒标记疫苗毒株的构建与拯救 | 第46-61页 |
| ·材料与方法 | 第46-54页 |
| ·实验材料 | 第46-47页 |
| ·实验方法 | 第47-54页 |
| ·结果 | 第54-59页 |
| ·pC-FLAG Bam-Bsp酶切鉴定 | 第54-55页 |
| ·多对酶切鉴定pC-FLAG全长质粒 | 第55页 |
| ·PCR鉴定pC-FLAG全长质粒 | 第55-56页 |
| ·将PCR结果送去测序 | 第56页 |
| ·FLAG标记的CSFV兔化弱毒株全基因组c DNA克隆的线性化 | 第56-57页 |
| ·FLAG标记的CSFV兔化弱毒嵌合病毒全基因组CDNA克隆的体外转录 | 第57页 |
| ·BHK电转染FLAG标记的CSFV兔化弱毒株嵌合病毒感染性病毒粒子的拯救 | 第57-58页 |
| ·SK6电转染FLAG标记的CSFV兔化弱毒株嵌合病毒感染性病毒粒子的拯救 | 第58-59页 |
| ·讨论 | 第59-60页 |
| ·小结 | 第60-61页 |
| 第五章 VC-FLAG病毒传代方法研究 | 第61-73页 |
| ·材料与方法 | 第61-65页 |
| ·实验材料 | 第61-62页 |
| ·方法 | 第62-65页 |
| ·结果 | 第65-70页 |
| ·vC-FLAG病毒的常规传代结果 | 第65页 |
| ·vC-FLAG不同细胞的适应性实验结果 | 第65-66页 |
| ·vC-FLAG病毒的带毒传代免疫组化染色结果 | 第66页 |
| ·vC-FLAG细胞毒上清RT-PCR结果 | 第66-67页 |
| ·vC-FLAG带毒传代不同代次细胞上清接种SK6细胞实验结果 | 第67页 |
| ·vC-FLAG带毒传代不同代次细胞上清ELISA检测结果 | 第67页 |
| ·vC-FLAG带毒传代不同代次细胞上清TCID50的测定结果 | 第67-68页 |
| ·vC-FLAG带毒细胞混合正常SK6细胞培养条件免疫组化鉴定结果 | 第68页 |
| ·vC-FLAG带毒细胞混合正常SK6细胞培养上清病毒荧光定量PCR检测 | 第68-70页 |
| ·讨论 | 第70-72页 |
| ·小结 | 第72-73页 |
| 第六章 猪瘟兔化弱毒疫苗FLAG标记毒株与兔体反应热 | 第73-80页 |
| ·材料与方法 | 第73-77页 |
| ·测定C株兔组织毒病毒含量 | 第73-74页 |
| ·兔体接种 | 第74页 |
| ·病毒兔体接种体温测定 | 第74页 |
| ·vC-FLAG兔体传代实验 | 第74-75页 |
| ·兔脾毒的RT-PCR鉴定 | 第75页 |
| ·vC-FLAG兔脾毒兔体反应热单位的测定 | 第75-76页 |
| ·兔血清猪瘟抗体测定 | 第76-77页 |
| ·结果 | 第77-78页 |
| ·病毒兔体接种体温测定结果 | 第77页 |
| ·兔脾毒的RT-PCR鉴定 | 第77页 |
| ·vC-FLAG兔脾毒兔体反应热单位的测定结果 | 第77-78页 |
| ·兔血清猪瘟抗体检测结果 | 第78页 |
| ·讨论 | 第78-79页 |
| ·小结 | 第79-80页 |
| 第七章 FLAG抗体检测方法的建立 | 第80-87页 |
| ·材料与方法 | 第81-83页 |
| ·实验材料 | 第81页 |
| ·FLAG合成肽包被ELISA反应板FLAG抗体检测方法的建立 | 第81页 |
| ·FLAG-BAP融合蛋白包被ELISA反应板FLAG抗体检测方法的建立 | 第81-82页 |
| ·FLAG合成肽与FLAG-BAP融合蛋白包被ELISA反应板检测方法的比较 | 第82页 |
| ·兔血清FLAG抗体的测定 | 第82页 |
| ·使用兔抗FLAG多抗进行检测方法的验证 | 第82-83页 |
| ·结果 | 第83-85页 |
| ·FLAG合成肽包被ELISA反应板FLAG抗体检测结果 | 第83页 |
| ·FLAG-BAP融合蛋白包被ELISA反应板FLAG抗体检测结果 | 第83-84页 |
| ·FLAG合成肽与FLAG-BAP融合蛋白包被ELISA反应板FLAG抗体检测比较结果 | 第84页 |
| ·兔血清FLAG抗体的测定 | 第84-85页 |
| ·使用兔抗FLAG多抗进行检测方法的验证 | 第85页 |
| ·讨论 | 第85-86页 |
| ·小结 | 第86-87页 |
| 第八章 结论与展望 | 第87-89页 |
| ·结论 | 第87页 |
| ·进一步工作的方向 | 第87-89页 |
| 参考文献 | 第89-97页 |
| 致谢 | 第97-98页 |
| 附录 | 第98-105页 |
| 作者简历 | 第105页 |
