| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 第1章 文献综述 | 第12-26页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第12-16页 |
| ·毕赤酵母表达系统的特点 | 第12页 |
| ·商业化的毕赤酵母表达菌株和载体 | 第12-14页 |
| ·毕赤酵母AOX1启动子 | 第14-16页 |
| ·毕赤酵母其它启动子的开发 | 第16-18页 |
| ·DAS和FLD1启动子 | 第16页 |
| ·GAP、TEF1和GCW14启动子 | 第16-18页 |
| ·PGK1、PEX8和YPT1启动子 | 第18页 |
| ·PG1和PG6启动子 | 第18页 |
| ·甲醇营养型酵母及其甲醇利用途径 | 第18-20页 |
| ·甲醇营养型酵母以及醇氧化酶基因 | 第18-19页 |
| ·甲醇利用途径 | 第19-20页 |
| ·甲醇利用途径中的转录调控因子 | 第20-24页 |
| ·激活因子Mxr1 | 第20-21页 |
| ·抑制因子C4qzn3 | 第21-22页 |
| ·抑制因子Rop | 第22页 |
| ·激活因子Trm2 | 第22-23页 |
| ·激活因子Mpp1 | 第23页 |
| ·激活因子Trm1 | 第23-24页 |
| ·激活因子Mit1和Prm1 | 第24页 |
| ·基于AOX1启动子的毕赤酵母表达系统的主要问题 | 第24-25页 |
| ·本课题的研究目的及意义 | 第25-26页 |
| 第2章 AOX1启动子转录激活因子Mit1和Prm1的鉴定 | 第26-48页 |
| ·前言 | 第26页 |
| ·实验材料 | 第26-31页 |
| ·菌株和质粒 | 第26页 |
| ·培养基和培养条件 | 第26-28页 |
| ·生物化学或分子生物学试剂 | 第28-31页 |
| ·实验方法 | 第31-37页 |
| ·毕赤酵母基因组的提取 | 第31-32页 |
| ·缺失株△mxr1和回补菌株的构建 | 第32-33页 |
| ·BFP-SKL表达菌株的构建以及过氧化物酶体的观察 | 第33-34页 |
| ·WTG、△mit1G、△prm1G、△mit1A、△prm1A菌株的构建 | 第34页 |
| ·GFP的酶标仪测定 | 第34页 |
| ·Aox显色反应 | 第34-35页 |
| ·染色质免疫共沉淀菌株的构建 | 第35页 |
| ·毕赤酵母蛋白的提取和Western blot分析 | 第35页 |
| ·染色质免疫共沉淀(ChIP) | 第35-37页 |
| ·其他方法 | 第37页 |
| ·结果与讨论 | 第37-46页 |
| ·Mit1和Prm1的锌指结构分析 | 第37-38页 |
| ·Mit1和Prm1为毕赤酵母甲醇代谢途径的特异性调控因子 | 第38-39页 |
| ·Mit1和Prm1对甲醇代谢相关基因和过氧化物酶体的调控 | 第39-40页 |
| ·Mit1和Prm1对PAOX1的调控 | 第40-42页 |
| ·Mit1和Prm1与甲醇利用途径基因启动子的结合 | 第42-46页 |
| ·本章小结 | 第46-48页 |
| 第3章 Mit1和Prm1的功能结构域 | 第48-64页 |
| ·前言 | 第48页 |
| ·实验材料 | 第48-52页 |
| ·实验方法 | 第52-54页 |
| ·△mit1-Mpp1和△mit1A-Mpp1菌株的构建 | 第52-53页 |
| ·Mit1和Prm1突变蛋白功能分析菌株的构建 | 第53页 |
| ·Mit1和Prm1结构域缺失定位分析菌株的构建 | 第53页 |
| ·Mit1冗余结构域缺失株的构建 | 第53-54页 |
| ·其他实验方法 | 第54页 |
| ·结果与讨论 | 第54-63页 |
| ·多形汉逊酵母Mpp1回补至毕赤酵母△mit1菌株 | 第54-55页 |
| ·Mit1和Prm1蛋白结构域的划分 | 第55-58页 |
| ·Mit1和Prm1结构域缺失蛋白的亚细胞定位 | 第58-59页 |
| ·Mit1和Prm1结构域缺失对菌株生长和PAOX1的影响 | 第59-62页 |
| ·Mit1的冗余结构域与甘油对PAOX1的阻遏 | 第62-63页 |
| ·本章小结 | 第63-64页 |
| 第4章 甲醇的信号转导和AOX1启动子的调控模型 | 第64-94页 |
| ·前言 | 第64页 |
| ·实验材料 | 第64-73页 |
| ·实验方法 | 第73-78页 |
| ·蛋白质相互作用 | 第73-76页 |
| ·Nrg1缺失和定位菌株的构建 | 第76页 |
| ·Mit1和Prm1自调控研究菌株的构建 | 第76-77页 |
| ·甲醇诱导信号转导分析菌株的构建 | 第77页 |
| ·其他实验方法 | 第77-78页 |
| ·结果与讨论 | 第78-93页 |
| ·抑制因子Nrg1对PAOX1的调控作用 | 第78-80页 |
| ·PAOX1转录调控因子蛋白水平的相互作用 | 第80-85页 |
| ·碳源对MIT1和PRM1表达的调控 | 第85-86页 |
| ·转录抑制因子对MIT1、PRM1、MXR1表达的调控作用 | 第86-87页 |
| ·Mit1和Prm1的自激活调控 | 第87-88页 |
| ·甲醇信号在转录激活因子间的转导途径 | 第88-90页 |
| ·PAOX1的调控模型 | 第90-93页 |
| ·本章小结 | 第93-94页 |
| 第5章 新型非甲醇诱导毕赤酵母表达系统的构建 | 第94-103页 |
| ·前言 | 第94页 |
| ·实验材料 | 第94页 |
| ·实验方法 | 第94-97页 |
| ·Mit1和Prm1过表达菌株的构建 | 第94-96页 |
| ·GFP表达菌株的构建 | 第96页 |
| ·△mig1△mig2△nrg1-AMit1菌株的构建 | 第96-97页 |
| ·其他方法 | 第97页 |
| ·结果与讨论 | 第97-102页 |
| ·抑制因子的缺失 | 第97页 |
| ·激活因子的过表达 | 第97-99页 |
| ·新型毕赤酵母表达系统的构建 | 第99-101页 |
| ·新型毕赤酵母表达系统的改进 | 第101-102页 |
| ·本章小结 | 第102-103页 |
| 第6章 结论、创新点与展望 | 第103-106页 |
| ·主要结论 | 第103-104页 |
| ·创新点 | 第104-105页 |
| ·展望 | 第105-106页 |
| 参考文献 | 第106-114页 |
| 致谢 | 第114-115页 |
| 攻读博士学位期间撰写的论文 | 第115页 |
