| 目录 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| 前言 | 第10-11页 |
| 文献综述 | 第11-20页 |
| 1 Myostatin基因及其前肽的研究进展 | 第11-15页 |
| ·Myostatin基因的发现 | 第11页 |
| ·Myostatin基因的分子结构 | 第11-12页 |
| ·Myostatin基因同源性及其表达特异性 | 第12-13页 |
| ·Myostatin蛋白的加工及Myostatin前肽的作用 | 第13-14页 |
| ·Myostatin的功能及作用机制 | 第14页 |
| ·Myostatin前肽的功能 | 第14-15页 |
| 2 抗病毒肽的研究进展 | 第15-18页 |
| ·EB(entry blocker)肽的研究进展 | 第16页 |
| ·蓝藻抗病毒蛋白N(CV-N)的研究进展 | 第16-18页 |
| 3 猪繁殖与呼吸综合征和猪瘟的研究进展 | 第18-20页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合征的研究进展 | 第18-19页 |
| ·猪瘟的研究进展 | 第19-20页 |
| 本研究的立项依据和研究意义 | 第20-21页 |
| 试验一 Myostatin前肽基因及其与抗病毒肽基因融合的真核表达载体的构建 | 第21-42页 |
| 1 试验材料 | 第21-22页 |
| ·菌株和质粒载体 | 第21页 |
| ·主要试剂 | 第21页 |
| ·主要仪器 | 第21-22页 |
| ·缓冲液与常用试剂的配制 | 第22页 |
| ·引物设计和序列分析软件 | 第22页 |
| 2 试验方法 | 第22-33页 |
| ·猪Myostatin前肽基因的扩增及EB和CV-N基因的合成 | 第22-25页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第25页 |
| ·目的片段的琼脂糖凝胶回收 | 第25-26页 |
| ·目的片段与载体的双酶切 | 第26页 |
| ·目的基因与质粒载体的连接反应 | 第26-27页 |
| ·转化感受态细胞 | 第27页 |
| ·质粒小量提取 | 第27-28页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定和测序鉴定 | 第28-29页 |
| ·载体构建过程 | 第29-33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-40页 |
| ·猪Myostatin前肽载体的构建 | 第33-35页 |
| ·猪Myostatin前肽和EB肽融合基因表达载体的构建 | 第35-38页 |
| ·猪Myostatin前肽和CV-N蛋白融合基因表达载体的构建 | 第38-40页 |
| 4 讨论 | 第40-42页 |
| ·酶切位点的选择 | 第40页 |
| ·关于构建融合基因时linker的选择 | 第40-42页 |
| 试验二 Myostatin前肽基因及其与抗病毒肽基因融合表达对C2C12细胞的增殖和抗病毒作用 | 第42-69页 |
| 1 试验材料 | 第42-43页 |
| ·动物细胞、质粒以及猪瘟和猪繁殖与呼吸综合征病毒 | 第42页 |
| ·分子试验生化试剂 | 第42页 |
| ·引物设计和序列分析软件 | 第42页 |
| ·仪器与设备 | 第42页 |
| ·常用试剂与缓冲液的配制 | 第42-43页 |
| 2 试验方法 | 第43-50页 |
| ·无内毒素质粒DNA的制备及纯化 | 第43-44页 |
| ·C2C12小鼠成肌细胞的冻存与复苏 | 第44-45页 |
| ·C2C12小鼠成肌细胞的传代培养 | 第45页 |
| ·C2C12小鼠成肌细胞的培养及质粒载体的转染 | 第45页 |
| ·C2C12小鼠成肌细胞的RNA提取 | 第45-46页 |
| ·普通RT-PCR检测目的基因的表达 | 第46页 |
| ·荧光定量PCR检测目的基因mRNA的表达 | 第46-47页 |
| ·荧光定量PCR数据统计分析 | 第47-48页 |
| ·细胞计数法测细胞的增殖 | 第48页 |
| ·细胞凋亡的检测 | 第48-50页 |
| 3 结果与分析 | 第50-67页 |
| ·小鼠C2C12成肌细胞的生长特性 | 第50页 |
| ·不同转染组C2C12细胞的RNA提取结果 | 第50-51页 |
| ·RT-PCR检测MSTN前肽基因转录 | 第51-52页 |
| ·RT-PCR检测MSTN前肽和EB肽融合基因转录 | 第52-53页 |
| ·RT-PCR检测MSTN前肽和CV-N肽融合基因转录 | 第53-54页 |
| ·荧光定量PCR检测MSTN pro、MSTN pro-L-EB和MSTN pro-L-CV-N基因结果 | 第54-60页 |
| ·不同转染组C2C12细胞的细胞增殖数结果 | 第60-62页 |
| ·不同转染组细胞凋亡结果 | 第62-67页 |
| 4 讨论 | 第67-69页 |
| ·关于荧光定量PCR反应 | 第67页 |
| ·Myostatin前肽对Myostatin作用的调控 | 第67-68页 |
| ·EB肽与CV-N蛋白对猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪瘟病毒的作用 | 第68-69页 |
| 全文结论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-74页 |
| Abstract | 第74-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
