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实时荧光PCR在肿瘤护理诊断中的应用研究

摘要第1-15页
Abstract第15-18页
第一章 绪论第18-52页
 第一节 肿瘤的个体化治疗与护理诊断第18-20页
   ·个体化治疗与肿瘤第18-19页
   ·护理诊断在肿瘤中的应用第19-20页
 第二节 分子生物标记物及其诊断方法第20-27页
   ·肺癌个体化治疗中的生物标记物第20-21页
   ·胃肠癌个体化治疗中的生物标记物第21-23页
   ·乳腺癌个体化治疗中的生物标记物第23页
   ·化疗药物在个体化治疗中的生物标记物第23-24页
   ·分子生物标记物的诊断方法第24-27页
 第三节 实时PCR技术在肿瘤护理诊断中的应用第27-34页
   ·实时PCR技术的化学基础第27-30页
   ·实时PCR技术的分析模式第30-34页
 第四节 本论文的研究目的,内容和意义第34-36页
 参考文献第36-52页
第二章 探针熔解曲线技术检测非小细胞肺癌EGFR基因突变第52-94页
 第一节 前言第52-59页
   ·肺癌现状第52页
   ·EGFR与非小细胞肺癌的靶向治疗第52-53页
   ·EGFR基因突变第53-55页
   ·EGFR基因已有检测技术第55-57页
   ·课题的提出第57-59页
 第二节 材料与方法第59-67页
   ·细胞系和突变质粒第59页
   ·肺癌临床标本收集第59页
   ·标本基因组DNA提取第59-62页
   ·引物探针设计第62-65页
   ·PCR及熔解反应条件第65页
   ·各突变检测灵敏度和选择性考察第65-66页
   ·临床标本检测第66-67页
 第三节 结果第67-83页
   ·EGFR突变检测试验设计第67-68页
   ·EGFR检测探针靶序列杂交结果第68-69页
   ·EGFR基因突变6管检测体系优化建立第69-72页
   ·各突变灵敏度及选择性第72-80页
   ·临床标本检测结果第80-83页
 第四节 讨论第83-87页
 参考文献第87-94页
第三章 多重定量PAP技术用于EGFR和KRAS基因突变检测第94-122页
 第一节 前言第94-99页
   ·结直肠癌现状第94页
   ·结直肠癌靶向治疗第94页
   ·靶向药物治疗耐药性与基因突变第94-95页
   ·KRAS基因突变检测方法第95-97页
   ·非小细胞肺癌EGFR基因突变检测第97-98页
   ·课题的提出第98-99页
 第二节 材料与方法第99-105页
   ·细胞系和突变质粒第99页
   ·结肠癌和肺癌临床标本收集第99-100页
   ·引物探针设计第100-102页
   ·PCR反应条件第102-103页
   ·选择性考察和定量能力考察第103-104页
   ·临床标本检测第104-105页
 第三节 结果第105-117页
   ·Real-time Tag-Bi-PAP技术原理及实验设计第105-107页
   ·PAP引物的质控第107-108页
   ·EGFR基因突变检测体系灵敏度,选择性和定量能力第108-110页
   ·KRAS基因突变检测体系灵敏度,选择性和定量能力第110-111页
   ·EGFR基因和KRAS基因突变检测体系的临床验证第111-117页
 第四节 讨论第117-119页
 参考文献第119-122页
第四章 多重qRT-PCR技术用于乳腺癌复发相关21基因定量第122-165页
 第一节 前言第122-130页
   ·乳腺癌概况第122页
   ·乳腺癌复发风险评估第122-129页
   ·本课题的提出第129-130页
 第二节 材料与方法第130-142页
   ·假病毒标准品构建及定量第130页
   ·乳腺癌标本采集和保存第130页
   ·RNA提取及质量控制第130-133页
   ·引物及探针设计第133-136页
   ·逆转录第136页
   ·多重qRT-PCR反应模型及温度条件选择第136-138页
   ·多重qRT-PCR体系定量能力考察第138-140页
   ·多重qRT-PCR体系的临床验证第140-142页
 第三节 结果第142-156页
   ·RNA标本质量控制第142-144页
   ·多重qRT-PCR反应模型及温度条件选择第144-147页
   ·参照基因校正模式选择第147页
   ·16个癌症相关基因单重效率考察第147-148页
   ·多重qRT-PCR定量检测体系建立第148-149页
   ·多重qRT-PCR定量检测体系定量能力考察第149-153页
   ·临床标本检测第153-156页
 第四节 讨论第156-159页
 参考文献第159-165页
英文缩写索引第165-166页
博士期间发表交流论文第166-167页
致谢第167页

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