| 博士学位论文评阅人、答辩委员会签名表 | 第1-5页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 英文缩略表 | 第12-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-21页 |
| ·引言 | 第13页 |
| ·大丽轮枝菌与棉花黄萎病 | 第13-14页 |
| ·大丽轮枝菌侵染过程、寄主的抵御反应及致病机理 | 第14-16页 |
| ·大丽轮枝菌的侵入、扩展及病症的形成 | 第14-15页 |
| ·寄主的防御反应 | 第15页 |
| ·大丽轮枝菌致病机理 | 第15-16页 |
| ·大丽轮枝菌分泌蛋白的致病性研究进展 | 第16-18页 |
| ·碳水化合物水解酶类 | 第16-17页 |
| ·非酶类分泌蛋白 | 第17-18页 |
| ·分泌蛋白组研究方法 | 第18-19页 |
| ·分泌蛋白的制备方法 | 第18页 |
| ·分泌蛋白的分离与鉴定 | 第18-19页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第19-21页 |
| 第二章 棉花组织诱导体系中大丽轮枝菌分泌蛋白组 ITRAQ 定量分析 | 第21-34页 |
| ·引言 | 第21页 |
| ·实验材料、试剂和仪器 | 第21-22页 |
| ·实验材料 | 第21页 |
| ·培养基和实验试剂 | 第21-22页 |
| ·实验仪器 | 第22页 |
| ·实验方法 | 第22-25页 |
| ·菌株的培养及表型鉴定 | 第22页 |
| ·培养基上清液中蛋白的提取 | 第22-23页 |
| ·蛋白质含量测定 | 第23页 |
| ·SDS-PAGE 电泳检测 | 第23页 |
| ·胞外蛋白致病性检测 | 第23-24页 |
| ·蛋白质的消化和 iTRAQ 标记 | 第24页 |
| ·肽段分离纯化及质谱检测 | 第24-25页 |
| ·蛋白质定性与定量分析流程 | 第25页 |
| ·差异蛋白功能注释和分泌蛋白预测 | 第25页 |
| ·潜在致病因子分析 | 第25页 |
| ·结果与分析 | 第25-32页 |
| ·在不同培养基中大丽轮枝菌 VdG1 生长表型观察 | 第25-26页 |
| ·胞外蛋白的致病性检测 | 第26-27页 |
| ·胞外差异蛋白 iTRAQ 定量结果 | 第27-28页 |
| ·差异蛋白功能注释 | 第28-29页 |
| ·潜在致病因子注释 | 第29-30页 |
| ·差异蛋白功能聚类分析 | 第30-31页 |
| ·差异表达蛋白在染色体上的定位 | 第31-32页 |
| ·差异表达蛋白中非致病因子功能分析 | 第32页 |
| ·讨论 | 第32-34页 |
| ·大丽轮枝菌的体外培养条件 | 第32页 |
| ·大丽轮枝菌分泌蛋白的提取 | 第32-33页 |
| ·大丽轮枝菌分泌蛋白中潜在致病因子分析 | 第33-34页 |
| 第三章 棉花组织诱导体系中细胞壁水解酶功能研究 | 第34-51页 |
| ·引言 | 第34页 |
| ·实验材料、试剂和仪器 | 第34-35页 |
| ·菌株与棉花材料 | 第34页 |
| ·实验试剂 | 第34页 |
| ·仪器设备 | 第34-35页 |
| ·实验方法 | 第35-39页 |
| ·CAZy 注释 | 第35页 |
| ·细胞壁水解酶分析 | 第35页 |
| ·代谢通路分析 | 第35页 |
| ·RNA 材料的准备 | 第35页 |
| ·RNA 的提取 | 第35-36页 |
| ·大丽轮枝菌基因组 DNA 的提取 | 第36页 |
| ·cDNA 第一链的反转录合成 | 第36-37页 |
| ·实时定量 PCR | 第37-39页 |
| ·结果与分析 | 第39-48页 |
| ·iTRAQ 鉴定差异蛋白中 CAZy 的分析 | 第39-41页 |
| ·CAZy 代谢通路分析 | 第41-43页 |
| ·参与果胶和纤维素降解的 CAZy 分析 | 第43-46页 |
| ·大丽轮枝菌果胶降解模式 | 第46-47页 |
| ·参与细胞壁降解的其它酶类 | 第47-48页 |
| ·讨论 | 第48-51页 |
| ·大丽轮枝菌细胞壁水解酶 | 第48-49页 |
| ·参与果胶降解的细胞壁水解酶 | 第49-50页 |
| ·参与植物细胞壁降解的其它酶类 | 第50-51页 |
| 第四章 大丽轮枝菌细胞壁水解酶 PL3 家族基因功能初步研究 | 第51-70页 |
| ·引言 | 第51页 |
| ·实验材料、试剂和仪器 | 第51-52页 |
| ·菌株与质粒 | 第51页 |
| ·抗生素及使用浓度 | 第51页 |
| ·实验设备 | 第51-52页 |
| ·实验方法 | 第52-62页 |
| ·大丽轮枝菌果胶降解酶比较基因组分析 | 第52页 |
| ·大丽轮枝菌 PL3 家族基因分析 | 第52页 |
| ·靶标基因同源重组片段的构建 | 第52-56页 |
| ·靶标基因同源重组片段与基因敲除载体 pGKO2-Gateway 连接 | 第56页 |
| ·重组质粒的转化、筛选 | 第56-58页 |
| ·重组质粒导入农杆菌 | 第58页 |
| ·农杆菌介导的大丽轮枝菌遗传转化 | 第58-59页 |
| ·单孢分离与分子鉴定 | 第59-60页 |
| ·突变体生长表型鉴定 | 第60页 |
| ·突变体致病力检测 | 第60-62页 |
| ·结果与分析 | 第62-69页 |
| ·比较基因组分析病原菌果胶降解酶的特点 | 第62页 |
| ·差异蛋白中 PL3 家族成员的相关分析 | 第62-63页 |
| ·基因敲除质粒的构建 | 第63-64页 |
| ·基因敲除转化子的筛选与鉴定 | 第64-66页 |
| ·突变体生长表型鉴定 | 第66-67页 |
| ·突变体致病力检测 | 第67-69页 |
| ·讨论 | 第69-70页 |
| ·大丽轮枝菌 PL3 超家族成员分析 | 第69页 |
| ·大丽轮枝菌 PL3 基因功能及致病性 | 第69-70页 |
| 第五章 全文结论 | 第70-75页 |
| ·结论 | 第70-71页 |
| ·大丽轮枝菌分泌蛋白组研究平台的建立 | 第70页 |
| ·差异分泌蛋白中潜在致病因子的挖掘 | 第70页 |
| ·大丽轮枝菌分泌型细胞壁水解酶的系统研究 | 第70页 |
| ·大丽轮枝菌果胶酶 PL3 家族成员功能初步研究 | 第70-71页 |
| ·讨论 | 第71-74页 |
| ·潜在致病因子的诱导表达 | 第71页 |
| ·分泌蛋白的提取 | 第71页 |
| ·潜在致病因子分析 | 第71-73页 |
| ·大丽轮枝菌果胶降解酶分析 | 第73-74页 |
| ·细胞壁水解酶 PL3 亚家族分析及功能验证 | 第74页 |
| ·后续工作 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-88页 |
| 附表 | 第88-103页 |
| 附录Ⅰ | 第103-105页 |
| 附录Ⅱ | 第105-106页 |
| 致谢 | 第106-107页 |
| 作者简历 | 第107-108页 |
