| 目录 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 缩略语表 | 第12-15页 |
| 第一篇 文献综述 | 第15-37页 |
| 第一章 猪流行性乙型脑炎的研究进展 | 第15-27页 |
| 1 猪流行性乙型脑炎分子生物学特征 | 第15-17页 |
| ·病原学特征 | 第15-16页 |
| ·流行病学特征 | 第16-17页 |
| ·临床症状和病理变化特征 | 第17页 |
| ·临床症状 | 第17页 |
| ·病理变化 | 第17页 |
| 2 猪流行性乙型脑炎病毒基因组的结构特征 | 第17-19页 |
| ·结构蛋白 | 第18-19页 |
| ·C蛋白 | 第18页 |
| ·prM/M蛋白 | 第18-19页 |
| ·E蛋白 | 第19页 |
| ·非结构蛋白 | 第19页 |
| 3 流行性乙型脑炎病毒的分类和分型 | 第19-20页 |
| 4 流行性乙型脑炎病毒的毒力和致病机理 | 第20-21页 |
| ·流行性乙型脑炎病毒的毒力影响因素 | 第20-21页 |
| ·流行性乙型脑炎病毒的致病机理 | 第21页 |
| 5 流行性乙型脑炎病毒的诊断方法 | 第21-23页 |
| ·临床诊断 | 第21页 |
| ·病原学诊断 | 第21-22页 |
| ·血清学诊断 | 第22-23页 |
| ·酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第22页 |
| ·免疫荧光检测法(IFA法) | 第22页 |
| ·血凝抑制试验 | 第22-23页 |
| ·分子生物学检测 | 第23页 |
| ·逆转录—聚合酶链式反应技术(RT-PCR) | 第23页 |
| ·基因芯片技术 | 第23页 |
| ·实时荧光PCR(Real-Time PCR) | 第23页 |
| 6 流行性乙型脑炎病毒疫苗的研究进展 | 第23-27页 |
| ·灭活疫苗 | 第24页 |
| ·减毒活疫苗 | 第24页 |
| ·基因工程疫苗 | 第24-27页 |
| ·基因工程亚单位疫苗 | 第24页 |
| ·基因工程重组活载体疫苗 | 第24-25页 |
| ·核酸疫苗 | 第25页 |
| ·合成肽疫苗 | 第25-27页 |
| 第二章 HBc颗粒疫苗的研究进展 | 第27-31页 |
| 1 乙肝核心抗原的结构特征 | 第27-28页 |
| 2 HBcAg的免疫学优势 | 第28-29页 |
| 3 HBeAg颗粒作为免疫载体研究进展 | 第29-31页 |
| 参考文献 | 第31-37页 |
| 第二篇 研究内容 | 第37-83页 |
| 第三章 重组原核质粒pET28a-HBC-loop3的构建及HBC-loop3蛋白的表达 | 第37-57页 |
| 摘要 | 第37-38页 |
| 1 材料与方法 | 第38-45页 |
| ·细菌与载体 | 第38页 |
| ·主要试剂、工具酶及仪器 | 第38-39页 |
| ·重组原核表达载体的构建 | 第39-41页 |
| ·目的基因的扩增 | 第39页 |
| ·DNA小量胶回收试剂盒提取凝胶中的DNA | 第39页 |
| ·目的基因连接pMD18-T载体 | 第39-40页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第40页 |
| ·载体和基因片段的连接反应及转化 | 第40-41页 |
| ·阳性质粒的鉴定 | 第41页 |
| ·转化Rosetta-2大肠杆菌感受态及阳性筛选 | 第41-42页 |
| ·阳性质粒的筛选和鉴定 | 第42页 |
| ·蛋白表达及纯化 | 第42-45页 |
| ·IPTG低温诱导表达 | 第42页 |
| ·超声波裂解菌体 | 第42-43页 |
| ·表达产物的可溶性分析 | 第43页 |
| ·蛋白纯化 | 第43页 |
| ·纯化重组蛋白HBC-loop3的SDS-聚丙烯酸胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析 | 第43-45页 |
| 2 结果 | 第45-52页 |
| ·目的基因的扩增结果 | 第45-46页 |
| ·双酶切获得基因片段和载体 | 第46页 |
| ·pET-28a-HBc-loop3阳性质粒的鉴定 | 第46-47页 |
| ·重组质粒转化PCR鉴定 | 第47-48页 |
| ·表达产物的分析 | 第48-49页 |
| ·重组蛋白纯化效果SDS-PAGE分析 | 第49-50页 |
| ·电镜观察 | 第50-51页 |
| ·纯化重组蛋白HBC-loop3的Western Blotting分析结果 | 第51-52页 |
| 3. 小结 | 第52-53页 |
| Abstract | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-57页 |
| 第四章 展示JEV EDIII loop3表位抗原的病毒样颗粒免疫原性的研究 | 第57-69页 |
| 摘要 | 第57页 |
| 1 材料 | 第57-58页 |
| ·蛋白、病毒和细胞 | 第57页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第57-58页 |
| ·实验动物 | 第58页 |
| 2 方法 | 第58-62页 |
| ·动物分组及免疫程序 | 第58页 |
| ·检测JEV抗体的间接ELISA方法的初步建立 | 第58-59页 |
| ·最适抗原包被浓度和血清稀释度的确定 | 第58页 |
| ·抗原包被最适条件的确定 | 第58页 |
| ·最佳封闭条件的确定 | 第58页 |
| ·一抗最适工作时间的选择 | 第58-59页 |
| ·酶标抗体工作时间的选择 | 第59页 |
| ·底物作用时间的选择 | 第59页 |
| ·结果判定临界值的选择 | 第59页 |
| ·符合性试验 | 第59页 |
| ·重复性试验 | 第59页 |
| ·ELISA法检测血清抗体 | 第59-60页 |
| ·血凝及血凝抑制实验 | 第60-61页 |
| ·病毒抗原制备 | 第60页 |
| ·血清处理 | 第60页 |
| ·鹅红细胞的制备 | 第60页 |
| ·血凝抑制试验 | 第60-61页 |
| ·蚀斑减少实验检测血清中和抗体滴度 | 第61-62页 |
| ·蚀斑形成试验 | 第61页 |
| ·蚀斑减少中和试验 | 第61-62页 |
| ·结果判定 | 第62页 |
| 3 结果 | 第62-64页 |
| ·颗粒疫苗接种小鼠的健康状况 | 第62页 |
| ·HBC-loop3颗粒抗原免疫小鼠血清抗体检测(ELISA法) | 第62-63页 |
| ·血凝与血凝抑制反应测抗体结果 | 第63-64页 |
| ·空斑减少实验测血清中和抗体 | 第64页 |
| 4 小结 | 第64-65页 |
| Abstract | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-69页 |
| 第五章 过氧化氢作为日本脑炎灭活苗灭活剂的效果研究 | 第69-83页 |
| 摘要 | 第69-70页 |
| 1 材料 | 第70页 |
| ·材料 | 第70页 |
| ·病毒和细胞 | 第70页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第70页 |
| ·实验动物 | 第70页 |
| 2 方法 | 第70-72页 |
| ·乙脑病毒的纯化 | 第70-71页 |
| ·病毒的扩增 | 第70-71页 |
| ·蔗糖密度梯度离心纯化病毒 | 第71页 |
| ·病毒的灭活及灭活效果的检测 | 第71页 |
| ·乙脑灭活苗的制备 | 第71页 |
| ·接种免疫 | 第71-72页 |
| ·首次免疫 | 第71-72页 |
| ·二次免疫 | 第72页 |
| 3 灭活抗原免疫效果评价 | 第72页 |
| ·间接ELISA检测血清抗体滴度 | 第72页 |
| ·血凝抑制试验检测抗体 | 第72页 |
| ·蚀斑减少实验检测血清中和抗体滴度 | 第72页 |
| 4 结果 | 第72-77页 |
| ·乙脑病毒抗原的制备 | 第72页 |
| ·病毒抗原纯化的结果 | 第72-73页 |
| ·病毒灭活效果的检测结果 | 第73页 |
| ·灭活疫苗接种小鼠的健康状况 | 第73页 |
| ·双氧水灭活乙脑抗原ELISA抗体效价检测结果 | 第73-74页 |
| ·血凝抑制(HI)实验结 | 第74页 |
| ·空斑抑制试验验结果 | 第74-77页 |
| 5 小结 | 第77-79页 |
| Abstract | 第79-81页 |
| 参考文献 | 第81-83页 |
| 全文总结 | 第83-85页 |
| 附录 | 第85-91页 |
| 致谢 | 第91页 |
