| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-30页 |
| ·药用植物次生代谢的分子研究 | 第10-17页 |
| ·药用植物次生代谢及产物的简介 | 第10-13页 |
| ·药用植物次生代谢机制的研究热点 | 第13-16页 |
| ·重楼属植物次生代谢途径功能酶的研究 | 第16-17页 |
| ·3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGR)的研究进展 | 第17-20页 |
| ·HMGR的结构与功能研究 | 第17-18页 |
| ·HMGR的反馈调节研究 | 第18-19页 |
| ·HMGR基因的研究 | 第19-20页 |
| ·RACE技术在植物功能基因上的研究进展 | 第20-28页 |
| ·RACE技术的原理 | 第20-25页 |
| ·RACE技术的关键环节 | 第25-26页 |
| ·RACE在植物基因克隆上的应用现状 | 第26-28页 |
| ·本论文的研究目的和内容 | 第28-30页 |
| ·本论文的研究目的 | 第28页 |
| ·本论文的研究内容 | 第28页 |
| ·本论文课题资助情况 | 第28-30页 |
| 第二章 球药隔重楼HMGR功能基因基于RACE技术的cDNA克隆 | 第30-48页 |
| ·引言 | 第30-31页 |
| ·实验材料 | 第31页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第31页 |
| ·样品来源 | 第31页 |
| ·实验方法 | 第31-38页 |
| ·总RNA的提取 | 第31-32页 |
| ·RNA浓度、纯度检测及纯化与反转录 | 第32-34页 |
| ·功能基因HMGR保守片段的克隆 | 第34-35页 |
| ·球药隔重楼HMGR基因3’端的克隆 | 第35-36页 |
| ·球药隔重楼HMGR基因5’端的克隆 | 第36-37页 |
| ·球药隔重楼HMGR基因全长序列的获得 | 第37-38页 |
| ·核酸与蛋白序列分析 | 第38页 |
| ·结果与讨论 | 第38-47页 |
| ·球药隔重楼总RNA质量检测 | 第38-39页 |
| ·球药隔重楼HMGR基因同源片段的检测 | 第39-40页 |
| ·3'端和5'端RACE及全长序列结果 | 第40-41页 |
| ·球药隔重楼HMGR基因生物信息学分析 | 第41-47页 |
| ·本章小结 | 第47-48页 |
| 第三章 HMGR基因的组织表达模式分析以及在大肠杆菌中的表达鉴定 | 第48-56页 |
| ·引言 | 第48页 |
| ·实验材料 | 第48-51页 |
| ·菌株和质粒 | 第48-50页 |
| ·工具酶 | 第50页 |
| ·试剂 | 第50页 |
| ·主要试剂的配制 | 第50页 |
| ·仪器与设备 | 第50-51页 |
| ·实验方法 | 第51-53页 |
| ·HMGR基因编码序列的扩增 | 第51页 |
| ·纯化后的HMGR cDNA与pTrc-AtIPI质粒的双酶切 | 第51-52页 |
| ·酶切后回收的HMGR cDNA和载体pTrc的连接及载体的自连 | 第52页 |
| ·质粒的转化 | 第52-53页 |
| ·结果与分析 | 第53-55页 |
| ·不含信号肽的PfHMGR基因的PCR扩增结果 | 第53页 |
| ·重组表达载体pTrc-PfHMGR的构建 | 第53页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第53-54页 |
| ·重组质粒pTrc-PfHMGR的序列测定 | 第54页 |
| ·pTrc-PfHMGR在大肠杆菌中表达的颜色鉴定结果 | 第54-55页 |
| ·本章小结 | 第55-56页 |
| 第四章 球药隔重楼功能基因的组织表达模式分析 | 第56-66页 |
| ·引言 | 第56-57页 |
| ·实验材料 | 第57页 |
| ·植物样本 | 第57页 |
| ·实验仪器和试剂 | 第57页 |
| ·实验方法 | 第57-60页 |
| ·RNA的提取和浓度检测 | 第57页 |
| ·引物设计 | 第57-58页 |
| ·四个基因的PCR扩增及产物的纯化与测序 | 第58-59页 |
| ·实时荧光定量RT-PCR | 第59-60页 |
| ·结果与讨论 | 第60-65页 |
| ·样品RNA及反转录的cDNA检测 | 第60-61页 |
| ·IPPI、FPS、SS基因RT-PCR及测序结果 | 第61-62页 |
| ·IPPI、FPS、SS基因Real-time PCR扩增曲线及熔解曲线分析 | 第62页 |
| ·球药隔重楼不同组织IPPI、FPS、SS基因的表达分析 | 第62-64页 |
| ·HMGR功能基因的组织表达结果分析 | 第64-65页 |
| ·本章小结 | 第65-66页 |
| 第五章 总结 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-72页 |
| 致谢 | 第72-74页 |
| 硕士期间研究成果 | 第74页 |
