| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 第1章 引言 | 第9-17页 |
| ·基因治疗 | 第9-10页 |
| ·基因治疗的前景 | 第9-10页 |
| ·几种重要的基因药物载体 | 第10页 |
| ·基因治疗目前存在的障碍和应对策略 | 第10页 |
| ·AAV 载体 | 第10-13页 |
| ·AAV与rAAV载体 | 第11页 |
| ·rAAV载体的转染过程 | 第11-13页 |
| ·rAAV载体的转染效率 | 第13页 |
| ·rAAV 载体转染效率优化策略 | 第13-15页 |
| ·基因工程手段 | 第13-14页 |
| ·非基因工程手段 | 第14-15页 |
| ·RNAi 和miRNA | 第15-17页 |
| 第2章 miR133 提高 rAAV 载体的表达效率 | 第17-29页 |
| ·实验材料、试剂与仪器 | 第17-18页 |
| ·实验材料与试剂 | 第17-18页 |
| ·主要实验仪器 | 第18页 |
| ·实验方法 | 第18-21页 |
| ·主要溶液的配制 | 第18-19页 |
| ·细胞培养 | 第19-20页 |
| ·miRNA的配制和保存 | 第20页 |
| ·mi RNA 脂质体转染细胞 | 第20页 |
| ·rAAV 、腺病毒和慢病毒转染细胞 | 第20-21页 |
| ·共聚焦荧光显微镜检测r AAV 在 A549、 HeLa细胞中的表达效率 | 第21页 |
| ·单孔荧光光度计检测r AAV在 A 549 、HeLa细胞中的表达效率 | 第21页 |
| ·统计学处理 | 第21页 |
| ·结果 | 第21-27页 |
| ·miR133提高ssAAV2载体的表达效率 | 第21-23页 |
| ·miR133提高不同血清型rAAV载体的表达效率 | 第23-25页 |
| ·miR133也能提高scAAV2载体的表达效率 | 第25-26页 |
| ·miRNA133不能提高腺病毒载体和慢病毒载体的表达效率 | 第26-27页 |
| ·讨论 | 第27-29页 |
| 第3章 miR133 提高 rAAV 载体表达效率的机制研究 | 第29-41页 |
| ·实验材料、试剂与仪器 | 第29-30页 |
| ·实验材料与试剂 | 第29-30页 |
| ·主要实验仪器 | 第30页 |
| ·实验方法 | 第30-34页 |
| ·主要溶液的配制 | 第30-33页 |
| ·软件预测miRNA133的靶基因 | 第33页 |
| ·Western blotting 检测miRNA133作用下细胞中EGFR含量的变化 | 第33页 |
| ·miRNA133和rAAV共转染NCI-H460细胞、表达效率的检测和数据分析 | 第33-34页 |
| ·结果 | 第34-40页 |
| ·miRNA133的靶基因预测与分析 | 第34-36页 |
| ·miRNA133降低了细胞中EGFR蛋白的含量 | 第36-37页 |
| ·miRNA133不能提高rAAV在EGFR阴性细胞NCI-H460中的表达效率 | 第37-40页 |
| ·讨论 | 第40-41页 |
| 第4章 miR133 提高 rAAV 载体表达效率的时间动力学和作用浓度范围检测 | 第41-49页 |
| ·实验材料、试剂与仪器 | 第41页 |
| ·实验方法 | 第41页 |
| ·结果 | 第41-47页 |
| ·miRNA133提高r AAV2 转染效率的时间动力学 | 第41-43页 |
| ·miRNA133 提高 rAAV2表达效率的作用浓度范围检测 | 第43-47页 |
| ·讨论 | 第47-49页 |
| 第5章 miR133 与其他药物共同作用对 rAAV 载体表达效率的影响 | 第49-71页 |
| ·实验材料、试剂与仪器 | 第50-51页 |
| ·实验材料与试剂 | 第50页 |
| ·主要实验仪器 | 第50-51页 |
| ·实验方法 | 第51-52页 |
| ·主要溶液的配制 | 第51页 |
| ·细胞复苏、培养、传代与冻存，miRNA的配制和保存,miRNA和rAAV的转染 | 第51页 |
| ·药物作用和rAAV的转染 | 第51-52页 |
| ·药物作用和miRNA、rAAV的转染 | 第52页 |
| ·荧光显微镜观察rAAV的表达、单孔荧光光度计检测rAAV的表达效率及数据分析 | 第52页 |
| ·结果 | 第52-68页 |
| ·不同机制的药物对rAAV载体的表达效率验证 | 第52-58页 |
| ·miRNA133与化学药物共同作用对r AAV 载体表达效率的影响 | 第58-68页 |
| ·讨论 | 第68-71页 |
| 第6章 miR133 与其他药物共同作用对肿瘤细胞增殖的影响 | 第71-97页 |
| ·实验材料、试剂与仪器 | 第71-72页 |
| ·实验材料与试剂 | 第71页 |
| ·主要实验仪器 | 第71-72页 |
| ·实验方法 | 第72-73页 |
| ·主要溶液的配制 | 第72页 |
| ·细胞复苏、培养、传代与冻存，miRNA、药物的配制和保存，m iRNA 、药物和rAAV的转染，结果的统计学分析 | 第72页 |
| ·MTT法测定细胞增殖率 | 第72页 |
| ·DAPI染色 | 第72-73页 |
| ·结果 | 第73-94页 |
| ·miRNA133对EGFR阴性和阳性细胞增殖的影响 | 第73-76页 |
| ·不同机制的抗肿瘤药物抑制HeLa和A549细胞增殖的验证 | 第76-85页 |
| ·miRNA133和不同机制的抗肿瘤药物共同作用对H eLa 和A 549细胞增殖的影响 | 第85-94页 |
| ·讨论 | 第94-97页 |
| 第7章 结论 | 第97-99页 |
| ·研究总结 | 第97-98页 |
| ·需进一步开展的工作 | 第98-99页 |
| 参考文献 | 第99-107页 |
| 致谢 | 第107-109页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第109页 |
