| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-22页 |
| 第一章 文献综述 | 第22-52页 |
| ·生物柴油概述 | 第22-28页 |
| ·生物柴油主要理化性质 | 第22-23页 |
| ·生物柴油的制备方法 | 第23-26页 |
| ·生物柴油发展历程 | 第26-28页 |
| ·真核生物油脂的代谢机理 | 第28-39页 |
| ·产油微生物及微生物油脂 | 第29-30页 |
| ·微生物产油脂培养条件优化方法 | 第30-31页 |
| ·真核生物油脂代谢调控机理 | 第31-39页 |
| ·原核生物油脂代谢调控 | 第39-43页 |
| ·原核细胞的油脂代谢 | 第39-40页 |
| ·原核细胞的油脂代谢工程 | 第40-43页 |
| ·中链脂肪酸及其乙酯 | 第43-50页 |
| ·中链脂肪酸 | 第43-44页 |
| ·中链脂肪酸合成涉及的酶类 | 第44-47页 |
| ·中链脂肪酸乙酯 | 第47-50页 |
| ·论文研究目的与研究内容 | 第50-52页 |
| ·研究目的 | 第50页 |
| ·研究内容 | 第50-52页 |
| 第二章 产长链生物柴油基因工程菌的构建 | 第52-80页 |
| ·引言 | 第52页 |
| ·实验材料 | 第52-53页 |
| ·菌株与质粒 | 第52-53页 |
| ·工具酶和试剂 | 第53页 |
| ·培养基及培养条件 | 第53页 |
| ·实验仪器 | 第53-54页 |
| ·实验方法 | 第54-66页 |
| ·酿酒酵母基因组DNA的提取 | 第54页 |
| ·假丝酵母基因组DNA的提取 | 第54-55页 |
| ·基因的扩增 | 第55-57页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第57页 |
| ·从琼脂糖凝胶中回收DNA片段 | 第57-58页 |
| ·扩增基因与测序载体的连接 | 第58页 |
| ·重组质粒的电转化 | 第58-60页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第60-61页 |
| ·目的基因片段的验证和序列分析 | 第61页 |
| ·重叠延伸PCR | 第61-62页 |
| ·目的基因与表达载体的连接 | 第62-63页 |
| ·酿酒酵母感受态细胞的制备 | 第63页 |
| ·重组质粒的转化 | 第63-64页 |
| ·重组酿酒酵母的筛选 | 第64页 |
| ·表达蛋白的SDS-PAGE分析 | 第64-65页 |
| ·脂肪酶活性测定 | 第65页 |
| ·脂肪酸组成的测定 | 第65-66页 |
| ·FAEEs的分析方法 | 第66页 |
| ·结果与讨论 | 第66-79页 |
| ·酿酒酵母基因组DNA提取 | 第66-67页 |
| ·基因片段的扩增 | 第67页 |
| ·测序载体的构建 | 第67-68页 |
| ·基因测序结果分析 | 第68-72页 |
| ·重组质粒pYES2-Lip2的鉴定 | 第72-73页 |
| ·重组质粒YEp352-PLC的鉴定 | 第73-74页 |
| ·重组蛋白的SDS-PAGE分析 | 第74-75页 |
| ·重组酵母的生长与脂肪酶酶活变化 | 第75-77页 |
| ·酿酒酵母油脂成分分析 | 第77-78页 |
| ·重组酵母菌中FAEEs含量的测定 | 第78-79页 |
| ·本章小结 | 第79-80页 |
| 第三章 酿酒酵母基因工程菌产生物柴油条件的优化 | 第80-110页 |
| ·引言 | 第80页 |
| ·实验材料 | 第80-81页 |
| ·菌种 | 第80页 |
| ·试剂 | 第80页 |
| ·培养基及发酵培养条件 | 第80-81页 |
| ·实验仪器 | 第81页 |
| ·实验方法 | 第81-84页 |
| ·油脂提取方法 | 第81-82页 |
| ·乙醇测定方法 | 第82页 |
| ·重组酵母细胞催化酯化反应 | 第82页 |
| ·重组酵母细胞的发酵培养 | 第82页 |
| ·GC-MS测定脂肪酸乙酯含量 | 第82-83页 |
| ·响应面法 | 第83页 |
| ·均匀设计法 | 第83-84页 |
| ·结果与讨论 | 第84-108页 |
| ·产油脂发酵条件的优化 | 第84-97页 |
| ·影响酵母产油脂的单因素试验 | 第84-91页 |
| ·影响酵母产油脂主要因素的筛选 | 第91-92页 |
| ·最陡爬坡试验设计及结果 | 第92-93页 |
| ·响应面设计优化产油脂发酵条件 | 第93-97页 |
| ·酿酒酵母联产油脂和乙醇的发酵条件优化 | 第97-105页 |
| ·均匀设计实验结果 | 第97-98页 |
| ·葡萄糖流加、通气量、搅拌转速对油脂产量的影响 | 第98-101页 |
| ·葡萄糖流加、通气量、搅拌转速对乙醇产量的影响 | 第101-103页 |
| ·产油脂与乙醇关系的分析 | 第103-104页 |
| ·产油脂和乙醇最优条件的验证 | 第104-105页 |
| ·酿酒酵母产FAEEs的条件优化 | 第105-108页 |
| ·以酿酒酵母细胞粉末为催化剂合成生物柴油 | 第105-106页 |
| ·细胞粉末用量对FAEEs产量的影响 | 第106页 |
| ·重组酿酒酵母胞内直接合成生物柴油的优化 | 第106-108页 |
| ·本章小结 | 第108-110页 |
| 第四章 中链脂肪酸乙酯的合成 | 第110-125页 |
| ·引言 | 第110页 |
| ·实验材料 | 第110-111页 |
| ·实验原料 | 第110页 |
| ·实验试剂及仪器 | 第110-111页 |
| ·实验方法 | 第111-113页 |
| ·微波萃取法 | 第111页 |
| ·樟树籽油脂肪酸组成分析 | 第111-112页 |
| ·酶法合成脂肪酸乙酯反应条件 | 第112页 |
| ·FAEEs产率测定 | 第112-113页 |
| ·FAEEs主要理化性质测定 | 第113页 |
| ·结果与讨论 | 第113-124页 |
| ·CSO提取条件的优化 | 第113-115页 |
| ·正交试验 | 第113-114页 |
| ·验证试验及多次提取 | 第114-115页 |
| ·CSO成分分析 | 第115-117页 |
| ·脂肪酶用量对FAEEs产率的影响 | 第117-118页 |
| ·水含量对FAEEs产率的影响 | 第118页 |
| ·油醇摩尔比对FAEEs产率的影响 | 第118-119页 |
| ·乙醇流加次数对FAEEs产率的影响 | 第119-120页 |
| ·mcFAEEs合成条件的优化 | 第120-121页 |
| ·固定化脂肪酶的使用寿命 | 第121-122页 |
| ·FAEEs的主要理化性质 | 第122-124页 |
| ·本章小结 | 第124-125页 |
| 第五章 中链脂肪酸及其乙酯基因工程菌的构建 | 第125-142页 |
| ·引言 | 第125页 |
| ·实验材料 | 第125-126页 |
| ·菌株与质粒 | 第125页 |
| ·工具酶和试剂 | 第125-126页 |
| ·培养基及培养条件 | 第126页 |
| ·仪器设备 | 第126页 |
| ·实验方法 | 第126-131页 |
| ·ccFatB的克隆 | 第126-127页 |
| ·不动杆菌基因组DNA的提取 | 第127-128页 |
| ·酰基转移酶基因atfA的克隆 | 第128-129页 |
| ·重组载体pETDuet-ccFatB的构建 | 第129页 |
| ·双基因重组载体pETDuet-ccFatB-atfA的构建 | 第129-130页 |
| ·重组质粒的转化 | 第130页 |
| ·重组菌的发酵培养与脂肪酸的提取 | 第130页 |
| ·重组菌的发酵培养与产物FAEEs的提取 | 第130-131页 |
| ·GC-MS分析 | 第131页 |
| ·结果与讨论 | 第131-141页 |
| ·ccFatB序列的优化 | 第131-132页 |
| ·樟树硫酯酶基因的克隆 | 第132-133页 |
| ·不动杆菌中酰基转移酶基因的克隆 | 第133页 |
| ·重组质粒pETDuet-ccFatB的构建 | 第133-134页 |
| ·重组质粒pETDuet-ccFatB-atfA的构建 | 第134-135页 |
| ·重组E.coli所产脂肪酸组分分析 | 第135-137页 |
| ·重组E.coli中FAEEs的分析 | 第137-139页 |
| ·乙醇流加对重组菌产脂肪酸及FAEEs的影响 | 第139-141页 |
| ·本章小结 | 第141-142页 |
| 第六章 结论与创新点 | 第142-145页 |
| ·结论 | 第142-143页 |
| ·创新点 | 第143-144页 |
| ·问题和展望 | 第144-145页 |
| 参考文献 | 第145-154页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第154-156页 |
| 致谢 | 第156-157页 |
| 作者和导师简介 | 第157-158页 |
| 附件 | 第158-159页 |