| 缩略词 | 第1-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 前言 | 第12-26页 |
| 1 哮喘 | 第12-16页 |
| ·支气管哮喘病的发展现状 | 第12-13页 |
| ·诱导哮喘发病的因素和发病机制 | 第13-14页 |
| ·哮喘发病的病理及病理生理学改变 | 第14-15页 |
| ·哮喘的治疗 | 第15-16页 |
| 2 酪氨酸激酶 | 第16-23页 |
| ·受体型酪氨酸激酶信号通路与特异抑制剂 | 第16-17页 |
| ·非受体型酪氨酸激酶信号通路与特异性抑制剂 | 第17-18页 |
| ·非特异性酪氨酸激酶抑制剂 | 第18页 |
| ·丝/苏氨酸激酶信号通路与治疗过敏性哮喘 | 第18-20页 |
| ·核转录因子抑制剂与治疗过敏性哮喘 | 第20-23页 |
| 3 Vam3简介 | 第23页 |
| 4 本文研究目标 | 第23-25页 |
| 5 技术路线 | 第25-26页 |
| 第一部分 类固醇拮抗性哮喘病理机制的研究 | 第26-57页 |
| 实验材料 | 第26-36页 |
| 1 实验材料 | 第26-36页 |
| ·细胞系及组织标本 | 第26-27页 |
| ·实验动物 | 第27页 |
| ·主要试剂 | 第27-29页 |
| ·引物的合成与设计 | 第29-30页 |
| ·主要仪器设备 | 第30-31页 |
| ·生物学软件 | 第31页 |
| ·常用试剂的配置 | 第31-34页 |
| ·Der p1,BAY11-7082,地塞米松和TNF-α溶液的配制 | 第34页 |
| ·氢氧化铝凝胶的配制 | 第34-35页 |
| ·动物实验抗原混合溶液的配制 | 第35-36页 |
| 实验方法 | 第36-46页 |
| 2 实验方法 | 第36-46页 |
| ·细胞的处理 | 第36页 |
| ·抗原处理细胞 | 第36-38页 |
| ·蛋白及细胞总RNA提取 | 第38-39页 |
| ·蛋白和RNA浓度测定 | 第39-40页 |
| ·Western Blot | 第40-41页 |
| ·逆转录(Reverse Transcription,RT)与PCR扩增 | 第41-42页 |
| ·细胞培养物上清与Elisa分析 | 第42页 |
| ·体内小鼠模型建立 | 第42-43页 |
| ·H&E染色 | 第43-44页 |
| ·免疫组织化学 | 第44页 |
| ·结果判定 | 第44-45页 |
| ·统计分析 | 第45-46页 |
| 结果 | 第46-54页 |
| 1 多重抗原DRA的重复刺激诱导嗜中性粒细胞型气道炎症,气道重塑,肥大细胞浸染和黏液高分泌 | 第46-48页 |
| 2 地塞米松抑制小鼠肺BAL液中免疫细胞数目的增加,但对嗜中性粒细胞无作用 | 第48-49页 |
| 3 多重抗原DRA的刺激增强BAL液中IL-8和其他细胞因子的水平 | 第49页 |
| 4 多重抗原DRA的刺激增强外周血中IgE的水平 | 第49-50页 |
| 5 地塞米松不能抑制Der p1活化的NF-κB信号通路 | 第50-52页 |
| 6 抗原Der p1通过NF-κB信号通路增强IL-8的表达 | 第52-54页 |
| 讨论 | 第54-56页 |
| 小结 | 第56-57页 |
| 第二部分 Vam3通过Syk信号通路抑制了抗原诱导的炎症 | 第57-78页 |
| 实验材料 | 第57-61页 |
| 1 实验材料 | 第57-61页 |
| ·细胞系及组织标本 | 第57页 |
| ·抗体 | 第57-58页 |
| ·试剂盒 | 第58页 |
| ·主要试剂 | 第58-59页 |
| ·主要仪器设备 | 第59页 |
| ·生物学软件 | 第59页 |
| ·常用试剂的配置 | 第59-61页 |
| 实验方法 | 第61-66页 |
| 2 实验方法 | 第61-66页 |
| ·用于Western Blot分析处理的细胞 | 第61页 |
| ·用于炎症因子分析处理的RBL-2H3细胞 | 第61页 |
| ·用于炎症因子分析处理的Raw264.7和THP-1细胞 | 第61-62页 |
| ·大鼠肥大细胞脱颗粒 | 第62页 |
| ·用Fura-2/AM法测定细胞内Ca~(2+)浓度 | 第62-63页 |
| ·Syk激酶检测反应系统 | 第63页 |
| ·确定反应体系最佳Syk激酶用量 | 第63-64页 |
| ·细胞总蛋白提取 | 第64页 |
| ·结果判定 | 第64-66页 |
| 结果 | 第66-74页 |
| 1 Vam3抑制肥大细胞脱颗粒 | 第66-67页 |
| 2 Vam3抑制Raw 264.7细胞内TNF-α的水平 | 第67-68页 |
| 3 Vam3抑制THP-1细胞内IL-8的水平 | 第68页 |
| 4 Vam3抑制多种炎症细胞内相关炎症因子的水平 | 第68-70页 |
| 5 Vam3特异性抑制Syk激酶的活性 | 第70-71页 |
| 6 Vam3抑制Syk激酶的活化 | 第71-72页 |
| 7 Vam3抑制胞浆型磷脂酶A2(cPLA2)和LAT激酶的磷酸化 | 第72-73页 |
| 8 Vam3抑制磷脂酶Cγ1(PLCγ-1)激酶的磷酸化 | 第73-74页 |
| 讨论 | 第74-77页 |
| 小结 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-86页 |
| 博士在读期间发表与待发表的文章 | 第86-87页 |
| 基金资助 | 第87-88页 |
| 文献综述 | 第88-100页 |
| References | 第96-100页 |
| 致谢 | 第100-101页 |
