| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 缩略语表（Abbreviation) | 第10-12页 |
| 第1章 文献综述 | 第12-19页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合征 | 第12页 |
| ·PRRSV病原特性 | 第12页 |
| ·PRRSV的分类及形态 | 第12页 |
| ·PRRSV的抗原性 | 第12页 |
| ·PRRSV分子生物学研究进展 | 第12-15页 |
| ·PRRSV基因组结构与功能 | 第12-13页 |
| ·PRRSV的蛋白质 | 第13-15页 |
| ·主要结构蛋白-GP5蛋白 | 第13-15页 |
| ·PRRS诊断方法研究进展 | 第15-17页 |
| ·病原学诊断 | 第15-16页 |
| ·血清学诊断 | 第16-17页 |
| ·PRRS疫苗研究进展 | 第17-19页 |
| ·PRRS常规疫苗 | 第17页 |
| ·PRRS新型疫苗 | 第17-19页 |
| 第2章 目的与意义 | 第19-20页 |
| 第3章 材料与方法 | 第20-36页 |
| ·试验材料 | 第20-23页 |
| ·细胞、毒株、菌株、实验动物 | 第20页 |
| ·载体 | 第20页 |
| ·工具酶及相关试剂 | 第20-21页 |
| ·培养基、抗生素及其配制 | 第21页 |
| ·相关缓冲液和试剂及其配制 | 第21-22页 |
| ·其它试剂与缓冲液 | 第22-23页 |
| ·血清 | 第23页 |
| ·试验方法 | 第23-36页 |
| ·细胞培养 | 第23页 |
| ·病毒增值 | 第23页 |
| ·总RNA的提取 | 第23页 |
| ·限制性内切酶酶切反应 | 第23-24页 |
| ·PCR产物或酶切产物的电泳检测 | 第24页 |
| ·PCR产物或酶切产物回收与纯化 | 第24页 |
| ·外源DNA片段与质粒载体的连接反应 | 第24-25页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第25页 |
| ·连接产物的转化 | 第25页 |
| ·质粒的制备 | 第25-27页 |
| ·质粒转染(脂质体介导转染法) | 第27页 |
| ·Western blot检测目的蛋白在真核细胞中的表达 | 第27-28页 |
| ·包涵体提取 | 第28-29页 |
| ·单抗的制备(徐志凯1992) | 第29-33页 |
| ·GP5-ELISA方法的建立 | 第33-34页 |
| ·半数细胞培养物感染量(TCID_(50))的测定 | 第34页 |
| ·微量中和试验(固定病毒-稀释血清法) | 第34页 |
| ·细胞免疫的检测 | 第34-35页 |
| ·动物试验 | 第35页 |
| ·统计学方法 | 第35-36页 |
| 第4章 结果与分析 | 第36-47页 |
| ·抗GP5蛋白的单克隆抗体的制备 | 第36-40页 |
| ·PRRSV WUH3株的ORF5基因的RT-PCR扩增 | 第36页 |
| ·GP5蛋白的原核表达质粒的构建和鉴定 | 第36-37页 |
| ·GP5蛋白的原核表达与纯化 | 第37-38页 |
| ·重组GP5蛋白最佳包被浓度的确定 | 第38页 |
| ·免疫BALB/C小鼠血清效价的测定 | 第38-39页 |
| ·Western Blotting验证抗GP5蛋白单克隆抗体 | 第39页 |
| ·间接免疫荧光(IFA)验证抗GP5蛋白单克隆抗体 | 第39-40页 |
| ·PRRSV GP5-ELISA诊断方法的建立 | 第40-41页 |
| ·GP5-ELISA最佳条件的确定 | 第40-41页 |
| ·GP5-ELISA阴阳界线的确定 | 第41页 |
| ·GP5-ELISA方法的交叉反应性、重复性试验 | 第41页 |
| ·GP5-ELISA与国外试剂盒的对比试验 | 第41页 |
| ·PRRSV核酸疫苗的研究 | 第41-47页 |
| ·真核质粒的构建 | 第41-43页 |
| ·Western blot检测目的蛋白在Hela细胞中的表达 | 第43-44页 |
| ·动物试验结果 | 第44-47页 |
| 第5章 讨论与结论 | 第47-50页 |
| ·讨论 | 第47-49页 |
| ·针对GP5蛋白的单克隆抗体制备 | 第47页 |
| ·PRRSV GP5-ELISA诊断方法的建立 | 第47-48页 |
| ·PRRSV核酸疫苗的研究 | 第48-49页 |
| ·结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-55页 |
| 致谢 | 第55页 |
