| 中文摘要 | 第1-14页 |
| ABSTRACT | 第14-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-23页 |
| ·植酸 | 第16页 |
| ·植酸酶 | 第16-18页 |
| ·植酸酶的定义 | 第16-17页 |
| ·植酸酶的分类 | 第17-18页 |
| ·中性植酸酶 | 第18-21页 |
| ·中性植酸酶的来源 | 第18-19页 |
| ·中性植酸酶一般酶学性质 | 第19页 |
| ·中性植酸酶的结构和催化机制 | 第19-20页 |
| ·中性植酸酶大肠杆菌表达系统 | 第20页 |
| ·中性植酸酶的应用 | 第20-21页 |
| ·本论文设计思路 | 第21-23页 |
| ·本课题立题依据及研究进展 | 第21-22页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第22-23页 |
| 第二章 植酸酶基因phy(ycD)的原核表达及纯化 | 第23-43页 |
| ·实验材料 | 第23-26页 |
| ·菌株和质粒 | 第23页 |
| ·用于大肠杆菌表达的引物 | 第23页 |
| ·主要试剂及溶液配制 | 第23-26页 |
| ·主要实验仪器 | 第26页 |
| ·实验方法 | 第26-34页 |
| ·中性植酸酶基因phy(ycD)的克隆 | 第26-27页 |
| ·中性植酸酶基因的亚克隆 | 第27-28页 |
| ·植酸酶基因phy(ycD)PCR扩增产物与载体pGEM-T-easy的连接与转化 | 第28页 |
| ·感受态细胞(Escherichia coli)DH5α的制备与转化 | 第28-29页 |
| ·重组质粒的提取 | 第29页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第29-30页 |
| ·阳性克隆的测序 | 第30页 |
| ·植酸酶基因phy(ycD)表达载体的构建 | 第30-31页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第31页 |
| ·阳性表达子的筛选 | 第31-32页 |
| ·表达载体pET-28a(+)-phy(ycD)在在大肠杆菌BL21(DE3)中的大量诱导表达 | 第32页 |
| ·表达产物的酶活性测定 | 第32-33页 |
| ·蛋白的纯化 | 第33页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第33-34页 |
| ·结果与分析 | 第34-41页 |
| ·克隆获得中性植酸酶基因及其序列测定 | 第34-35页 |
| ·芽孢杆菌Bacillus subtilis YCD植酸酶的信号肽切割位点预测 | 第35-36页 |
| ·芽孢杆菌Bacillus subtilis YCD植酸酶的结构模拟 | 第36-37页 |
| ·芽孢杆菌Bacillus subtilis YCD植酸酶蛋白的二级结构分析 | 第37-38页 |
| ·中性植酸酶基因phy(ycD)的PCR扩增 | 第38页 |
| ·表达载体pET-28a(+)-phy(ycD)的构建 | 第38-39页 |
| ·重组质粒pET-28a(+)-phy(ycD)的酶切鉴定 | 第39-40页 |
| ·中性植酸酶基因阳性表达子的筛选 | 第40页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE结果 | 第40-41页 |
| ·凝胶过滤层析结果 | 第41页 |
| ·讨论 | 第41-43页 |
| 第三章 重组植酸酶phy(ycD)的性质 | 第43-59页 |
| ·实验材料 | 第43-44页 |
| ·主要生化试剂 | 第43页 |
| ·主要试剂的配制 | 第43-44页 |
| ·主要实验仪器 | 第44页 |
| ·实验方法 | 第44-50页 |
| ·钼蓝法测定植酸酶酶活性的方法 | 第44页 |
| ·无机磷标准曲线的绘制 | 第44页 |
| ·采用Bradford试剂盒法测定植酸酶蛋白的浓度 | 第44-45页 |
| ·重组植酸酶比活的测定 | 第45页 |
| ·Ca~(2+)对酶活性的影响 | 第45页 |
| ·最适酶促反应pH的测定 | 第45页 |
| ·中性植酸酶pH稳定性 | 第45-46页 |
| ·中性植酸酶最适反应温度 | 第46页 |
| ·中性植酸酶热稳定性 | 第46页 |
| ·Ca~(2+)对纯r-phy(ycD)热稳定性的影响 | 第46-47页 |
| ·一级反应时间与动力学参数的测定 | 第47-48页 |
| ·纯酶r-phy(ycD)圆二色谱检测 | 第48-49页 |
| ·不同化学试剂及金属离子对植酸酶活性的影响 | 第49-50页 |
| ·实验结果 | 第50-57页 |
| ·无机磷标准曲线的绘制 | 第50页 |
| ·蛋白浓度标准曲线的绘制 | 第50页 |
| ·纯酶r-phy(ycD)比活性的测定 | 第50-51页 |
| ·Ca~(2+)对酶活性的影响 | 第51-52页 |
| ·酶活最适pH及pH稳定性 | 第52页 |
| ·最适酶促反应温度及其热稳定性 | 第52-53页 |
| ·不同浓度Ca~(2+)对纯r-phy(ycD)热稳定性的影响 | 第53-54页 |
| ·重组植酸酶r-phy(ycD)热恢复分析 | 第54页 |
| ·动力学常数的测定 | 第54-55页 |
| ·r-phy(ycD)圆二色谱检测 | 第55页 |
| ·不同金属离子和化学试剂对纯r-phy(ycD)活性影响 | 第55-57页 |
| ·讨论 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 总结与展望 | 第65-68页 |
| 附录I | 第68-69页 |
| 附录II | 第69-70页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 个人简况及联系方式 | 第72-74页 |
