| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 前言 | 第11-23页 |
| 1 禽呼肠孤病毒概述 | 第11-16页 |
| ·呼肠孤病毒简介 | 第12页 |
| ·病原学 | 第12-13页 |
| ·基因组与蛋白 | 第13-14页 |
| ·禽呼肠孤病毒的诊断方法 | 第14-15页 |
| ·病原的分离与鉴定 | 第14页 |
| ·血清学试验方法 | 第14-15页 |
| ·分子生物学实验技术 | 第15页 |
| ·禽呼肠孤病毒在禽体内的分布 | 第15-16页 |
| 2 荧光定量PCR技术 | 第16-23页 |
| ·荧光定量PCR技术发展史 | 第16-17页 |
| ·荧光定量PCR的原理 | 第17-18页 |
| ·荧光定量PCR的种类 | 第18-21页 |
| ·TaqMan探针法 | 第18页 |
| ·双杂交探针法 | 第18-19页 |
| ·复合探针法 | 第19页 |
| ·分子信标法 | 第19-20页 |
| ·SYBR Green Ⅰ染料法 | 第20-21页 |
| ·LUX primers法 | 第21页 |
| ·荧光定量PCR的应用 | 第21-23页 |
| 研究目的及意义 | 第23-24页 |
| 材料与方法 | 第24-30页 |
| 1 试验材料 | 第24-26页 |
| ·主要仪器设备 | 第24页 |
| ·主要试剂与耗材 | 第24-25页 |
| ·供试毒株与菌株 | 第25页 |
| ·实验动物 | 第25页 |
| ·主要溶液及其配制 | 第25-26页 |
| 2 试验方法 | 第26-30页 |
| ·引物的设计 | 第26页 |
| ·阳性标准品的制备 | 第26-28页 |
| ·DRV核酸(RNA)的提取 | 第26页 |
| ·反转录与常规PCR反应 | 第26-27页 |
| ·目的片段的回收与纯化 | 第27页 |
| ·目的片段与pMD18-T载体的连接 | 第27页 |
| ·连接产物的转化 | 第27页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第27-28页 |
| ·重组质粒的鉴定与序列测定 | 第28页 |
| ·阳性质粒纯度与浓度的测定 | 第28页 |
| ·荧光定量RT-PCR方法的建立与优化 | 第28-29页 |
| ·引物浓度的优化 | 第28页 |
| ·退火温度的优化 | 第28-29页 |
| ·敏感性试验 | 第29页 |
| ·特异性和重复性试验 | 第29页 |
| ·雏鸭人工感染试验与临床样品的收集 | 第29页 |
| ·数据分析 | 第29-30页 |
| 试验结果 | 第30-40页 |
| 1 目的基因的PCR扩增 | 第30页 |
| 2 重组质粒的鉴定 | 第30-31页 |
| 3 荧光定量RT-PCR的优化结果 | 第31-33页 |
| ·引物浓度的优化结果 | 第31-32页 |
| ·退火温度的优化结果 | 第32-33页 |
| 4 荧光定量RT-PCR标准曲线的建立 | 第33-35页 |
| 5 荧光定量RT-PCR的特异性试验 | 第35-36页 |
| 6 荧光定量RT-PCR的重复性试验 | 第36页 |
| 7 人工感染雏鸭的临床症状与剖检病变 | 第36-37页 |
| 8 荧光定量RT-PCR与常规RT-PCR对样品的检出率比较 | 第37-38页 |
| 9 鸭源呼肠孤病毒在不同组织的含量 | 第38-40页 |
| 讨论 | 第40-44页 |
| 1 应用荧光定量RT-PCR方法检测呼肠孤病毒的优点 | 第40页 |
| 2 荧光定量RT-PCR方法的优化 | 第40-41页 |
| 3 荧光定量RT-PCR方法的建立 | 第41-42页 |
| 4 荧光定量RT-PCR与常规RT-PCR的比较 | 第42页 |
| 5 雏鸭感染呼肠孤病毒后组织病理变化与病毒分布情况的关系 | 第42-44页 |
| 结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-54页 |
| 致谢 | 第54页 |
