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猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白的遗传变异分析及间接ELISA检测方法的建立与应用

摘要第1-9页
ABSTRACT第9-11页
缩略词表第11-12页
文献综述第12-40页
 1 猪繁殖与呼吸综合征病毒的发现与命名第12-13页
 2 PRRSV的分类地位第13页
 3 PRRSV的一般特性第13-15页
   ·PRRSV的形态特征第13-14页
   ·PRRSV的理化特性第14-15页
 4 PRRSV的分子生物学特征第15-23页
   ·PRRSV的基因组组成第15-16页
   ·PRRSV基因编码的蛋白质及其功能第16-18页
   ·PRRSV的基因组变异和RNA重组第18-21页
   ·PRRSV的抗原性变异第21-22页
   ·PRRSV的毒力变异第22-23页
 5 PRRSV的流行病学特点第23-24页
 6 PRRSV的致病机制第24页
 7 PRRSV的诊断方法第24-28页
   ·临床诊断第24-25页
   ·病毒分离法第25页
   ·血清学方法第25-26页
   ·分子生物学诊断第26-28页
 参考文献第28-40页
第一章 中国大陆PRRSVN蛋白的遗传变异分析第40-52页
 摘要第40-41页
 1 材料与方法第41页
   ·材料第41页
   ·方法第41页
 2 结果第41-48页
   ·PRRSV中国大陆分离株N蛋白序列的统计第41页
   ·PRRSV中国大陆分离株N蛋白的进化分析第41-44页
   ·PRRSV中国大陆分离株N氨基酸序列的比对分析第44-48页
 3 讨论第48-49页
 参考文献第49-50页
 ABSTRACT第50-52页
第二章 我国优势流行毒株N蛋白基因的表达及鉴定第52-68页
 摘要第52-53页
 1 材料与方法第53页
   ·质粒、菌株第53页
   ·主要试剂第53页
   ·主要仪器第53页
 2 方法第53-61页
   ·PRRSV RNA的提取第53-54页
   ·PRRSV-N基因RT-RCR扩增第54-55页
   ·目的片段的回收纯化第55-56页
   ·目的片段的克隆第56-57页
   ·重组质粒DNA的提取第57页
   ·重组质粒的鉴定第57-58页
   ·重组质粒的测序鉴定第58页
   ·原核表达载体pET-28a(+)/ORF7的构建第58-59页
   ·连接产物的转化、重组质粒DNA的提取及鉴定第59页
   ·重组质粒pET-28a-N在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达第59-61页
 3 结果第61-64页
   ·N基因的RT-PCR扩增第61页
   ·克隆载体pMD18-T-N酶切鉴定第61-62页
   ·重组质粒pET-28a(+)-N的酶切鉴定第62-63页
   ·表达产物的SDS-PAGE第63页
   ·重组蛋白的纯化结果第63-64页
   ·重组蛋白的Western blotting分析第64页
 4 讨论第64-66页
 参考文献第66-67页
 ABSTRACT第67-68页
第三章 PRRSVN蛋白间接ELISA检测方法的建立与应用第68-80页
 摘要第68-69页
 1 材料与方法第69-72页
   ·质粒、菌株、血清第69页
   ·主要试剂和仪器第69页
   ·方法第69-72页
 2 结果第72-76页
   ·抗原抗体最佳稀释度的确定第72页
   ·抗原最佳包被条件的确定第72-73页
   ·最佳封闭条件的确定第73-74页
   ·阴阳性临界值的确定第74页
   ·特异性实验第74-75页
   ·重复性试验第75-76页
   ·符合性试验第76页
 3 讨论第76-78页
 参考文献第78-79页
 ABSTRACT第79-80页
全文总结第80-82页
附录第82-86页
致谢第86页

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