| 目录 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-18页 |
| ·DsbA折叠酶 | 第10-14页 |
| ·DsbA的发现 | 第10页 |
| ·DsbA的结构 | 第10-13页 |
| ·DsbA协助蛋白质折叠 | 第13-14页 |
| ·DsbA-FrnE | 第14-18页 |
| ·DsbA-FrnE的发现 | 第14-16页 |
| ·DsbA-FrnE与聚酮类化合物的生物合成 | 第16-18页 |
| 第2章 引言 | 第18-20页 |
| ·研究的目的与意义 | 第18页 |
| ·实验的内容和技术路线 | 第18-20页 |
| ·实验内容 | 第18-19页 |
| ·技术路线 | 第19-20页 |
| 第3章 蜡梅CpDsbA-FrnE基因的克隆与序列分析 | 第20-30页 |
| ·实验材料与试剂 | 第20-21页 |
| ·蜡梅花cDNA文库 | 第20页 |
| ·菌株与载体 | 第20页 |
| ·主要设备 | 第20页 |
| ·主要试剂 | 第20页 |
| ·自配的主要试剂 | 第20-21页 |
| ·实验方法 | 第21-23页 |
| ·EST序列特征分析 | 第21页 |
| ·CpDsbA-FrnE基因cDNA的获得 | 第21-23页 |
| ·CpDsbA-FrnE基因cDNA的生物信息学分析 | 第23-24页 |
| ·分析软件 | 第23-24页 |
| ·结果与分析 | 第24-28页 |
| ·CpDsbA-FmE克隆子的获得及其cDNA序列特征 | 第24页 |
| ·目标克隆子的EST序列特征分析与保守结构域分析 | 第24-25页 |
| ·CpDsbA-FmE的物化特征 | 第25-28页 |
| ·小结 | 第28-30页 |
| 第4章 CpDsba-FrnE基因的表达特征分析 | 第30-40页 |
| ·实验材料和方法 | 第30-33页 |
| ·植物材料及处理方法 | 第30页 |
| ·利用CTAB法提取蜡梅基因组DNA(略有改动) | 第30-31页 |
| ·总RNA的提取及cDNA第一链的获得 | 第31-33页 |
| ·实时荧光定量实验 | 第33页 |
| ·结果与分析 | 第33-38页 |
| ·蜡梅总RNA提取 | 第34页 |
| ·荧光定量体系优化 | 第34-36页 |
| ·蜡梅CpDsbA-FrnE基因的表达特征 | 第36-38页 |
| ·小结 | 第38-40页 |
| 第5章 CpDsbA-FrnE基因的原核表达及含重组质粒的菌株的抗逆性分析 | 第40-52页 |
| ·实验材料、试剂和仪器 | 第40-41页 |
| ·菌株、载体 | 第40页 |
| ·分子生物学试剂 | 第40页 |
| ·主要设备和耗材 | 第40-41页 |
| ·实验方法介绍 | 第41-46页 |
| ·引物设计 | 第42页 |
| ·目的片段的PCR扩增 | 第42-43页 |
| ·目的片段的回收 | 第43页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第43-44页 |
| ·IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)诱导融合蛋白的表达 | 第44-45页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳 | 第45页 |
| ·Ni-NTA His·Bind树脂纯化 | 第45-46页 |
| ·含重组质粒的表达菌株transetta(pET32a-FrnE)的抗逆性分析 | 第46页 |
| ·结果与分析 | 第46-50页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第46-47页 |
| ·转化表达菌株transetta(DE3)PCR检测 | 第47页 |
| ·融合蛋白的诱导纯化 | 第47页 |
| ·考马斯亮蓝法蛋白浓度测定 | 第47-48页 |
| ·含重组质粒的表达菌株transetta(pET32a-FrnE)的抗逆性分析 | 第48-50页 |
| ·小结 | 第50-52页 |
| 第6章 CpDsbA-FrnE基因转化烟草及转基因型烟草抗旱耐盐性分析 | 第52-64页 |
| ·实验材料 | 第52-53页 |
| ·植物材料 | 第52页 |
| ·菌株、载体 | 第52页 |
| ·自配试剂 | 第52-53页 |
| ·培养基基本配方 | 第53页 |
| ·实验方法介绍 | 第53-57页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第53-54页 |
| ·DNA微弹的制备 | 第54-55页 |
| ·烟草组培苗的预处理 | 第55页 |
| ·基因枪介导法转化烟草 | 第55-56页 |
| ·轰击后烟草叶片的培养 | 第56页 |
| ·筛选培养 | 第56页 |
| ·生根培养 | 第56页 |
| ·转基因烟草的胁迫处理 | 第56-57页 |
| ·结果与分析 | 第57-61页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第57页 |
| ·转基因烟草卡那霉素生根检测 | 第57-58页 |
| ·GUS组织化学染色 | 第58页 |
| ·转基因型烟草检测 | 第58-60页 |
| ·转基因型烟草抗旱性、耐盐性分析 | 第60-61页 |
| ·小结 | 第61-64页 |
| 第7章 总结 | 第64-66页 |
| ·结论 | 第64-65页 |
| ·下一步计划 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-72页 |
| 缩略词表(中英文对照) | 第72-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
