| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 目录 | 第9-12页 |
| 第一部分 文献综述 | 第12-45页 |
| 第一章 低温冷害与昆虫抗冻蛋白 | 第12-14页 |
| 第二章 抗寒转基因植株的检测方法 | 第14-20页 |
| 1 传统的检测方法 | 第14-18页 |
| ·分子水平检测 | 第15-17页 |
| ·基因组水平检测 | 第15-16页 |
| ·转录水平检测 | 第16-17页 |
| ·蛋白水平检测 | 第17页 |
| ·生理生化检测 | 第17-18页 |
| 2 生物传感器检测 | 第18-20页 |
| ·表面等离子体共振生物传感器 | 第18-19页 |
| ·多孔硅光学生物传感器 | 第19页 |
| ·压电生物传感器 | 第19-20页 |
| 第三章 转基因沉默及增强转基因表达的策略 | 第20-28页 |
| 1 调控转基因表达的基因沉默可能机制 | 第20-23页 |
| 2 增强转基因表达的策略 | 第23-28页 |
| ·绝缘子 | 第23-25页 |
| ·增强子阻断绝缘子 | 第24-25页 |
| ·屏蔽绝缘子 | 第25页 |
| ·启动子 | 第25-26页 |
| ·转化方法策略 | 第26-27页 |
| ·密码子优化策略 | 第27-28页 |
| 参考文献 | 第28-45页 |
| 第二部分 研究正文 | 第45-117页 |
| 第一章 转昆虫抗冻蛋白基因棉花的分子检测及其抗寒性研究 | 第45-100页 |
| 1 材料和主要试剂 | 第46-47页 |
| ·供试材料 | 第46页 |
| ·主要试剂 | 第46-47页 |
| 2 实验方法 | 第47-66页 |
| ·重组质粒的制备 | 第47页 |
| ·花粉管通道法转化棉花 | 第47页 |
| ·实验室转基因棉花种植 | 第47页 |
| ·卡那素抗性筛选 | 第47-48页 |
| ·棉花基因组小量提取 | 第48-49页 |
| ·棉花基因组 PCR | 第49页 |
| ·棉花总 RNA 的提取 | 第49-51页 |
| ·cDNA 的合成 | 第51-52页 |
| ·棉花基因组 RT-PCR | 第52页 |
| ·Southern blot 检测 | 第52-60页 |
| ·棉花 DNA 提取 | 第52-53页 |
| ·探针的制备及效率检测 | 第53-56页 |
| ·点杂交 | 第56-58页 |
| ·Southern 杂交 | 第58-60页 |
| ·PCR-Southern | 第60页 |
| ·Western blot 检测 | 第60-62页 |
| ·植物蛋白提取 | 第60-61页 |
| ·SDS-PAGE 及 Western blot | 第61-62页 |
| ·低温(2℃)对转基因和野生型棉花表型及生理生化指标的影响 | 第62-66页 |
| ·电导率的测定 | 第63页 |
| ·丙二醛含量测定 | 第63-64页 |
| ·脯氨酸含量测定 | 第64-65页 |
| ·转基因棉花可溶性蛋白含量测定及 THA 测定 | 第65-66页 |
| 3 结果与分析 | 第66-91页 |
| ·花粉管通道法转化棉花 | 第66-68页 |
| ·棉花基因组小量提取 | 第68页 |
| ·2011.7 MNS T2 & MNS T1 转基因棉花分子检测 | 第68-75页 |
| ·转基因棉花的 PCR 检测及测序验证 | 第68-73页 |
| ·部分 T2 代棉花进一步分子检测（2011.7 MNS T2） | 第73-75页 |
| ·PCR 检测 | 第73页 |
| ·PCR –Southern 检测 | 第73-74页 |
| ·RT-PCR 检测 | 第74-75页 |
| ·2012.3 Lab1 T3 代棉花分子检测 | 第75-78页 |
| ·PCR 检测 | 第75-76页 |
| ·RT-PCR 检测 | 第76-77页 |
| ·Western blot | 第77-78页 |
| ·转基因阳性结果统计 | 第78页 |
| ·2012.5 Lab2 T3 代转基因棉花代棉花分子检测 | 第78-82页 |
| ·卡纳筛选 | 第79-80页 |
| ·PCR 检测 | 第80页 |
| ·Lab2 T3 代转基因阳性结果统计 | 第80-82页 |
| ·2012.7 MNS T3 & 2012.7 MNS T1 代转基因棉花 PCR 检测 | 第82-83页 |
| ·T3 转基因棉花 Southern blot 检测 | 第83-85页 |
| ·探针效率检测 | 第83-84页 |
| ·Dot blot 检测 | 第84页 |
| ·Southern blot 检测 | 第84-85页 |
| ·2012.10 Lab T4 转基因棉花耐寒性检测 | 第85-91页 |
| ·T4 转基因棉花室内种植 | 第85-88页 |
| ·T4 代转基因棉花卡纳筛选 | 第88页 |
| ·T4 代转基因棉花的抗寒性检测 | 第88-90页 |
| ·T4 代转基因棉花相对电导率和丙二醛、脯氨酸含量的测定 | 第90-91页 |
| 4 讨论 | 第91-94页 |
| 参考文献 | 第94-100页 |
| 第二章 基于多孔硅生物传感器的转抗冻基因棉花检测 | 第100-117页 |
| 1 利用单层多孔硅蛋白生物传感器检测抗冻蛋白 | 第100-108页 |
| ·材料和仪器 | 第101页 |
| ·方法 | 第101-103页 |
| ·抗血清制备 | 第101-102页 |
| ·棉花叶片总蛋白的提取 | 第102页 |
| ·单层多孔硅薄膜材料的制备和氧化膜的形成 | 第102页 |
| ·多孔硅芯片活化处理 | 第102页 |
| ·抗冻蛋白抗体的固定及蛋白的免疫检测 | 第102-103页 |
| ·结果与讨论 | 第103-108页 |
| 2 利用多元光子晶体结构生物传感器检测抗冻蛋白基因 | 第108-114页 |
| ·材料和仪器 | 第109页 |
| ·方法 | 第109-111页 |
| ·抗冻蛋白基因的准备 | 第109-110页 |
| ·多元光子晶体芯片的结构 | 第110页 |
| ·多元光子晶体芯片的制备及功能化处理 | 第110页 |
| ·多元光子晶体芯片免疫检测抗冻蛋白基因 AFP | 第110-111页 |
| ·结果与讨论 | 第111-114页 |
| 参考文献 | 第114-117页 |
| 第三部分 结论与展望 | 第117-119页 |
| 英文缩略语 | 第119-121页 |
| 个人简介 | 第121-122页 |
| 硕士期间参加的研究课题和发表的论文 | 第122-123页 |
| 致谢 | 第123页 |
