| 英文缩略词 | 第1-7页 |
| 中文摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 前言 | 第9-14页 |
| 第二章 材料与方法 | 第14-37页 |
| 一、实验材料 | 第14-18页 |
| 1、质粒、受体菌株及细胞株 | 第14页 |
| 2、转基因小鼠 | 第14页 |
| 3、各种抗体、酶类和相关试剂 | 第14-15页 |
| 4、常用试剂配制 | 第15-17页 |
| 5、主要仪器设施 | 第17-18页 |
| 6、计算机软件及数据库 | 第18页 |
| 二、实验方法 | 第18-37页 |
| 1、质粒构建 | 第18页 |
| 2、PCR扩增目的基因 | 第18-19页 |
| 3、感受态制备方法(RbCl法) | 第19-20页 |
| 4、琼脂糖凝胶电泳方法 | 第20-21页 |
| 5、质粒或PCR产物的酶切反应 | 第21页 |
| 6、PCR产物或酶切产物条带的回收 | 第21页 |
| 7、pMD18-T载体和目的基因的连接 | 第21-22页 |
| 8、质粒的转化 | 第22页 |
| 9、质粒的小量制备 | 第22-24页 |
| 10、质粒的大量制备 | 第24-25页 |
| 11、细胞培养 | 第25-26页 |
| 12、细胞复苏 | 第26页 |
| 13、细胞换液 | 第26页 |
| 14、细胞传代 | 第26-27页 |
| 15、细胞冻存 | 第27页 |
| 16、血细胞计数板法直接计数细胞 | 第27页 |
| 17、细胞转染 | 第27-28页 |
| 18、Trizol法抽提取细胞全RNA | 第28-29页 |
| 19、反转录PCR | 第29-30页 |
| 20、组织DNA抽提 | 第30页 |
| 21、组织mRNA抽提 | 第30-31页 |
| 22、PCR检测质粒在体内的分布 | 第31页 |
| 23、酶联免疫吸附实验(ELISA)检测小鼠血浆中hFIX抗原 | 第31-33页 |
| 24、肝脏损伤检测 | 第33页 |
| 25、质粒尾静脉快冲注射 | 第33-34页 |
| 26、动物实验与血浆、血清采集 | 第34页 |
| 27、Western Blotting | 第34-36页 |
| 28、统计学分析 | 第36-37页 |
| 第三章 实验结果 | 第37-57页 |
| 一、载体构建 | 第37-48页 |
| 1、RBE hAAT FIX的构建 | 第37-41页 |
| 2、RBE HCR hAAT FIX的构建 | 第41-48页 |
| 二、hFIX在体外的表达 | 第48-50页 |
| ·Western Blotting检测24小时HEK293细胞内hFIX表达 | 第48页 |
| ·ELISA检测HEK293细胞外hFIX表达 | 第48-49页 |
| ·ELISA检测hFIX在不同细胞中的表达情况 | 第49-50页 |
| 三、hFIX在转基因实验小鼠体内的表达 | 第50-52页 |
| 四、PCR分析质粒DNA在体内分布 | 第52-53页 |
| 五、RT-PCR分析hFIX mRNA在体内不同器官中的表达情况 | 第53-54页 |
| 六、检测肝脏损伤ALT肝脏损伤情况 | 第54-57页 |
| 第四章 讨论与结论 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-61页 |
| 非病毒载体的基因治疗综述 | 第61-84页 |
| 一、非病毒载体基因传递方法 | 第61-64页 |
| 二、裸DNA物理传递方式 | 第64-66页 |
| 三、非病毒载体—病毒的模仿物 | 第66-68页 |
| 四、DNA安全的整合进入人类基因组 | 第68-73页 |
| 五、非病毒治疗载体前景：需求和对策 | 第73-75页 |
| 参考文献 | 第75-84页 |
| 论文发表及获奖情况 | 第84-85页 |
| 致谢 | 第85-87页 |
