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水稻甲基结合蛋白MBD701的克隆、植物表达载体的构建及遗传转化

致谢第1-5页
目录第5-8页
摘要第8-9页
1 文献综述第9-18页
   ·表观遗传学第9-11页
     ·DNA 甲基化第9页
     ·蛋白质共价修饰第9页
     ·RNA 调控的基因沉默第9-10页
     ·副突变第10页
     ·染色质重塑第10页
     ·遗传印记第10-11页
   ·植物的 DNA 甲基化及其生物学功能第11-12页
     ·甲基化胞嘧啶在植物基因组中的分布第11页
     ·DNA 甲基化与植物的生长发育第11-12页
       ·植物发育过程中 DNA 甲基化模式的变化第11-12页
       ·DNA 甲基化与春化作用的关系第12页
       ·DNA 甲基化与基因组印记第12页
     ·DNA 甲基化调控基因表达的可能的机理第12页
   ·MBD 研究进展第12-16页
     ·MBD 蛋白的结构特点第12-13页
     ·拟南芥 MBD 研究进展第13-16页
     ·其他植物 MBD 研究进展第16页
   ·RNA 干扰技术在植物基因功能中的研究现状及展望第16-18页
   ·水稻遗传转化方法的研究进展及应用前景第18页
2 引言第18-19页
3 材料与方法第19-31页
   ·试验材料第19-21页
     ·受体材料第19页
     ·主要仪器设备第19页
     ·工具酶及试剂盒第19页
     ·质粒与菌株第19页
     ·主要试剂配制第19-20页
     ·PCR 引物第20-21页
   ·实验方法第21-31页
     ·总 RNA 提取操作步骤(Trizol 法)及质量检测第21-23页
       ·试剂第21页
       ·实验准备第21页
       ·总 RNA 提取第21-22页
       ·总 RNA 质量及浓度测定第22页
       ·总 RNA 的纯化第22-23页
     ·目的基因的克隆第23-27页
       ·cDNA 第一条链的合成第23页
       ·基因克隆的 PCR 反应第23-24页
       ·PCR 扩增产物的检测与回收纯化第24页
       ·回收产物与 pBS-T 载体的连接第24页
       ·重组载体对大肠杆菌的转化第24-25页
       ·DNA 的热击转化第25页
       ·重组质粒的阳性鉴定第25页
       ·重组质粒的提取、纯化及序列分析第25-27页
     ·植物表达载体的构建第27-29页
       ·水稻 pCAMPVII-35s-MBD701-i 表达载体的构建第27-28页
       ·水稻 pCAMPVII-RGA-MBD701-i 植物表达载体的构建第28-29页
     ·农杆菌介导的水稻遗传转化第29-31页
       ·根癌农杆菌介导法遗传转化水稻第29-30页
       ·转基因植株的初步鉴定第30-31页
4 结果与分析第31-41页
   ·MBD701 基因的全长 cDNA 序列分析第31-35页
     ·RNA 质量检测及第一链的获得第31页
     ·MBD701 基因的克隆及序列分析第31-35页
   ·植物表达载体的构建第35-38页
     ·水稻 pCAMPVII-35s-MBD701-i 表达载体的构建第35-38页
     ·水稻 pCAMPVII-RGA-MBD701-i 表达载体的构建第38页
   ·水稻遗传转化结果第38-41页
     ·水稻胚性愈伤的获得第38-39页
     ·抗性愈伤组织筛选及植株再生第39-40页
     ·转基因植株的 PCR 鉴定第40-41页
5 结论与讨论第41-43页
   ·克隆了 MBD701 基因,并系统分析其结构特征第41页
   ·成功构建了植物表达载体第41-42页
   ·获得了初步鉴定的转基因水稻第42-43页
参考文献第43-47页
Abstract第47-48页

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