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构建转基因鱼类细胞以快速检测环境污染物的遗传毒性

摘要第1-8页
ABSTRACT第8-16页
第一章 文献综述第16-33页
 1 环境污染简介第16-17页
 2 遗传毒性检测技术的研究概况第17-23页
   ·体外实验第18-22页
     ·建立在细胞基础上的遗传毒性检测技术第18-21页
       ·哺乳动物细胞的基因突变实验第18页
       ·单细胞凝胶电泳实验第18-19页
       ·微核实验第19-20页
       ·荧光原位杂交技术第20页
       ·体外染色体畸变实验第20-21页
     ·建立在细菌基础上的遗传毒性检测实验-Ames 实验第21-22页
   ·体内实验第22-23页
     ·转基因动物基因突变实验第22页
     ·显性致死实验第22-23页
     ·体内染色体畸变实验(Ishidate,1988)第23页
 3 p53 信号通路与 DNA 损伤第23-25页
 4 p21 基因的表达与 DNA 损伤第25-26页
 5 转染技术简介第26-28页
 6 双荧光素酶报告基因系统介绍第28-29页
 7 牙鲆鳃细胞系简介第29-30页
 8 本文的立题依据、研究目的及采用的技术路线第30-33页
第二章 FG 细胞系转染条件的优化及其 p53 信号通路完整性的确定第33-48页
 1 前言第33-34页
 2 材料与方法第34-43页
   ·材料第34-35页
     ·细胞系第34页
     ·质粒第34页
     ·化学药品第34页
     ·实验仪器第34-35页
   ·实验方法第35-43页
     ·溶液配制第35-36页
     ·细胞培养第36页
     ·DNA 质粒提取第36-38页
       ·质粒的转化(以 pGL-p21-luc 为例,其他质粒类似操作,操作过程参照 Trans10 ChemicallyCompetent Cell 说明书)第36-37页
       ·质粒的提取(以 pGL-p21-luc 为例,其他质粒相同操作)第37-38页
     ·FG 细胞转染条件的优化第38-42页
       ·转染试剂的选择第38-40页
       ·共转染质粒之间比例的优化第40-42页
     ·FG 细胞的内源性 p53 信号通路完整性的检测第42-43页
 3 结果与分析第43-47页
   ·质粒的提取第43页
   ·转染试剂的选择第43-44页
   ·共转染质粒之间最佳比例的确定第44-45页
   ·FG 细胞内源性 p53 信号通路完整性的确定第45-47页
 4 小结第47-48页
第三章 稳定转染 p21FGLuc 细胞的建立第48-55页
 1 前言第48-49页
 2 材料与方法第49-53页
   ·材料第49-50页
     ·FG 细胞第49页
     ·质粒第49页
     ·化学药品第49-50页
     ·主要仪器第50页
   ·实验方法第50-53页
     ·G418 对 FG 细胞的最佳筛选浓度第50页
     ·稳定转染 p21FGLuc 细胞的建立第50-53页
 3 结果与分析第53-54页
   ·FG 细胞的最佳 G418 筛选浓度第53-54页
   ·稳定转染 p21FGLuc 细胞的建立第54页
 4 小结第54-55页
第四章 转基因鱼类细胞(p21FGLuc)遗传毒性检测系统的特异性和灵敏性的验证第55-76页
 1 前言第55-57页
 2 材料与方法第57-63页
   ·实验材料第57页
     ·主要试剂第57页
     ·主要的仪器第57页
   ·实验方法第57-63页
     ·溶液配制第57-58页
     ·MTT 检测第58-59页
     ·p21FGLuc 细胞遗传毒性检测系统特异性的验证第59-60页
       ·三种药物诱导 FG 细胞荧光信号表达的时间效应关系检测第59-60页
       ·三种药物诱导 FG 细胞荧光信号表达的剂量效应关系检测第60页
     ·p21FGLuc 细胞遗传毒性检测系统灵敏度的验证第60-62页
     ·p21FGLuc 细胞遗传毒性检测系统可靠性的验证第62-63页
 3 实验结果第63-72页
   ·MTT 检测实验结果第63-65页
   ·p21FGLuc 细胞遗传毒性检测系统特异性的验证第65-68页
   ·p21FGLuc 细胞遗传毒性检测系统灵敏度的验证第68-71页
   ·p21FGLuc 细胞遗传毒性检测系统可靠性的验证第71-72页
 4 讨论第72-76页
参考文献第76-83页
致谢第83-84页
作者简介第84页

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