| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-10页 |
| 前言 | 第10-13页 |
| 1. 犬新孢子虫形态 | 第10页 |
| 2. 犬新孢子虫抗原 | 第10页 |
| 3. 犬新孢子虫的危害 | 第10-11页 |
| 4. 预防措施 | 第11页 |
| 5. 免疫学及疫苗的研究 | 第11页 |
| 6. 本研究目的及意义 | 第11-13页 |
| 材料与方法 | 第13-27页 |
| 1 材料 | 第13-17页 |
| ·虫株与菌株 | 第13页 |
| ·细胞及实验动物 | 第13页 |
| ·血清与二抗 | 第13页 |
| ·载体与主要试剂 | 第13-14页 |
| ·试验所需溶液 | 第14-16页 |
| ·主要仪器 | 第16-17页 |
| 2 方法 | 第17-27页 |
| ·引物的设计与合成 | 第17页 |
| ·牛源犬新孢子虫的体外培养 | 第17页 |
| ·虫体DNA的提取 | 第17页 |
| ·NcMAG1基因和IFN-γ基因的PCR扩增与拼接 | 第17-18页 |
| ·纯化PCR产物 | 第18页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第18-19页 |
| ·目的基因与pMD18-T Simple Vector连接 | 第19页 |
| ·连接产物的转化 | 第19页 |
| ·重组质粒pMD18-NcMAG1-IFN-γ的提取 | 第19页 |
| ·重组质粒pMD18-NcMAG1-IFN-γ的鉴定 | 第19页 |
| ·pMD18-NcMAG1-IFN-γ及pGEX-4T-2质粒的纯化回收 | 第19-20页 |
| ·NcMAG1-IFN-γ重组片段与表达载体的连接、转化和筛选 | 第20页 |
| ·原核表达载体的鉴定 | 第20页 |
| ·重组表达质粒的诱导表达 | 第20页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE电泳 | 第20-21页 |
| ·表达产物的Western-blotting分析 | 第21页 |
| ·重组蛋白的大量表达 | 第21页 |
| ·包涵体的鉴定 | 第21-22页 |
| ·纯化融合蛋白 | 第22页 |
| ·真核表达质粒的构建及鉴定 | 第22-23页 |
| ·重组体转染细胞 | 第23页 |
| ·间接免疫荧光检测 | 第23页 |
| ·Western-blotting鉴定 | 第23页 |
| ·重组表达质粒的大量提取 | 第23-24页 |
| ·接种实验动物 | 第24页 |
| ·免疫动物血清分离 | 第24-25页 |
| ·间接ELISA检测体液免疫水平 | 第25页 |
| ·流式细胞术测定细胞免疫水平 | 第25-26页 |
| ·数据分析 | 第26-27页 |
| 结果 | 第27-39页 |
| ·牛源犬新孢子虫的体外培养 | 第27页 |
| ·目的基因的扩增 | 第27页 |
| ·重组质粒PMD18-NcMAG1-IFN-г的PCR鉴定 | 第27-28页 |
| ·PMD18-NcMAG1-IFN-г的双酶切鉴定及测序 | 第28页 |
| ·PGEX-4T-NcMAG1-IFN-г的PCR鉴定 | 第28-29页 |
| ·重组质粒PGEX-4T-NcMAG1-IFN-г的酶切鉴定 | 第29页 |
| ·NcMAG1-IFN-г融合基因表达蛋白SDS-PAGE电泳 | 第29-30页 |
| ·NcMAG1-IFN-г融合基因表达蛋白的WESTERN-BLOTTING分析 | 第30页 |
| ·蛋白存在形式的鉴定 | 第30-31页 |
| ·纯化蛋白的鉴定 | 第31页 |
| ·重组质粒pVAX-NcMAG1-IFN-г的PCR鉴定 | 第31-32页 |
| ·重组质粒pVAX-NcMAG1-IFN-г的酶切鉴定 | 第32页 |
| ·IFAT 检测 pVAX-NcMAGl-IFN- y 融合基因表达 | 第32-33页 |
| ·Western-blottingpVAX-NcMAGl-IFN-Y 融基因表达 | 第33页 |
| ·体液免疫水平检测 | 第33-34页 |
| ·BALB/c小鼠T淋巴细胞亚群含量检测 | 第34-39页 |
| 讨论 | 第39-42页 |
| 结论 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 作者简介 | 第49-50页 |
| 在研期间发表的论文 | 第50页 |
