| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-17页 |
| 前言 | 第17-21页 |
| 一、我国DS的概况 | 第17页 |
| 二、DS的特点 | 第17页 |
| 三、DS高危人群 | 第17-18页 |
| 四、DS临床表现 | 第18页 |
| 五、DS筛查现状 | 第18-19页 |
| 六、SD筛查的局限性 | 第19页 |
| 七、血清标一记物 | 第19页 |
| 八、抑制素A与唐氏综合症 | 第19-21页 |
| 第一部分 INHA基因的表达载体的构建及鉴定 | 第21-33页 |
| 1 材料 | 第21-22页 |
| ·质粒与菌株 | 第21页 |
| ·主要试剂 | 第21页 |
| ·主要仪器 | 第21页 |
| ·主要溶液的配制 | 第21-22页 |
| 2 方法 | 第22-25页 |
| ·引物设计 | 第22-23页 |
| ·RNA提取 | 第23页 |
| ·RT-PCR反应 | 第23-24页 |
| ·重组质粒pET32a-INHA和pET32a-INHA1的构建与鉴定 | 第24-25页 |
| ·重组质粒pET32a/INHA和pET32a/INHA1的构建与鉴定 | 第25页 |
| 3 结果 | 第25-31页 |
| ·RT-PCR | 第25-26页 |
| ·pET32a-INHA和pET32a-INHA1重组质粒的构建及鉴定 | 第26-27页 |
| ·测序鉴定 | 第27-31页 |
| 4 讨论 | 第31-32页 |
| 5 小结 | 第32-33页 |
| 第二部分 重组蛋白的表达纯化以及多克隆抗体的制备与鉴定 | 第33-43页 |
| 1 材料 | 第33-34页 |
| ·主要试剂 | 第33页 |
| ·主要仪器 | 第33页 |
| ·溶液及培养基配制 | 第33-34页 |
| 2 实验方法 | 第34-38页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第34-35页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第35页 |
| ·融合蛋白的大量诱导表达 | 第35页 |
| ·融合蛋白的优化表达 | 第35-36页 |
| ·表达产物的纯化 | 第36页 |
| ·重组蛋白的抗原性检测(Western blot) | 第36-37页 |
| ·动物免疫 | 第37页 |
| ·效价测定 | 第37页 |
| ·多抗与胎盘组织的Western blot鉴定 | 第37-38页 |
| 3 结果 | 第38-41页 |
| ·重组质粒pET32a-INHA和pET32a-INHA1的表达 | 第38-39页 |
| ·重组质粒PET32a-INHA1的表达优化 | 第39页 |
| ·重组表达蛋白的纯化 | 第39-40页 |
| ·表达产物鉴定 | 第40-41页 |
| ·多抗与胎盘组织的Western blot鉴定结果 | 第41页 |
| 4 讨论 | 第41-43页 |
| 第三部分 INHA和INHBA基因的抗原性分析以及多肽的合成与连接 | 第43-51页 |
| 1 材料 | 第43页 |
| ·主要试剂 | 第43页 |
| ·主要仪器 | 第43页 |
| ·蛋白质氨基酸序列:INHA HUMAN | 第43页 |
| ·多肽 | 第43页 |
| 2 方法 | 第43-45页 |
| ·计算机分析软件及网络预测 | 第43-44页 |
| ·抗原多肽的合成与连接 | 第44-45页 |
| ·抗原多肽的合成 | 第44页 |
| ·用EDC的方法连接多肽与大分子蛋白KLH和BSA | 第44页 |
| ·用DCC的方法连接多肽与大分子蛋白KLH和BSA | 第44页 |
| ·多肽与大分子蛋白KLH和BSA的连接后的纯化 | 第44页 |
| ·以及光度法计算偶联物的结合比 | 第44-45页 |
| 3 结果 | 第45-48页 |
| ·蛋白的二级结构的预测 | 第45-46页 |
| ·利用网络服务器预测INHA的抗原表位 | 第46-47页 |
| ·利用网络服务器预测INHBA的抗原表位 | 第47-48页 |
| ·预测两个蛋白的B细胞表位 | 第48页 |
| 4 讨论 | 第48-51页 |
| 第四部分 单克隆抗体的制备及鉴定 | 第51-63页 |
| 1 材料 | 第51-53页 |
| ·试剂 | 第51页 |
| ·细胞与动物 | 第51页 |
| ·主要仪器 | 第51页 |
| ·主要试剂配制 | 第51-53页 |
| 2 方法 | 第53-57页 |
| ·抗原制备 | 第53页 |
| ·动物免疫 | 第53-54页 |
| ·效价测定 | 第54页 |
| ·细胞融合 | 第54-55页 |
| ·阳性克隆的筛选、克隆化和诱生腹水 | 第55-56页 |
| ·抗体特异性鉴定 | 第56-57页 |
| 3 结果 | 第57-60页 |
| ·杂交瘤细胞株的建立 | 第57-58页 |
| ·抗体的特异性鉴定 | 第58-59页 |
| ·单克隆抗体培养上清的效价 | 第59-60页 |
| ·单克隆抗体的纯化结果 | 第60页 |
| 4 讨论 | 第60-62页 |
| 5 小结 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-70页 |
| 缩略词 | 第70-71页 |
| 硕士期间发表论文情况 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72-74页 |
| 统计学证明 | 第74页 |
