| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-24页 |
| ·乳脂球及被膜研究概述 | 第13-16页 |
| ·脂滴的研究进展 | 第16-17页 |
| ·PAT 家族蛋白与脂滴代谢 | 第17-22页 |
| ·Perilipin、ADRP 和TIP47 的概述 | 第19-20页 |
| ·Perilipin、ADRP 的功能概述 | 第20页 |
| ·TIP47 的结构 | 第20-21页 |
| ·TIP47 基因的功能 | 第21页 |
| ·TIP47 基因的研究进展 | 第21-22页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第22-24页 |
| 第二章 西农萨能羊乳腺组织TIP47 基因的cDNA 全长克隆及序列分析 | 第24-35页 |
| ·材料与方法 | 第24-27页 |
| ·材料 | 第24-25页 |
| ·试验方法 | 第25-27页 |
| ·结果与分析 | 第27-32页 |
| ·TIP47 基因cDNA 的克隆 | 第27-28页 |
| ·TIP47 基因的序列分析 | 第28-29页 |
| ·TIP47 基因的同源性分析 | 第29-30页 |
| ·TIP47 基因的结构预测分析 | 第30-32页 |
| ·TIP47 基因的系统进化树分析 | 第32页 |
| ·讨论 | 第32-33页 |
| ·关于引物设计 | 第32-33页 |
| ·关于TIP47 基因 | 第33页 |
| ·小结 | 第33-35页 |
| 第三章 西农萨能羊TIP47 基因的组织表达分析 | 第35-39页 |
| ·材料与方法 | 第35-36页 |
| ·材料 | 第35页 |
| ·方法 | 第35-36页 |
| ·结果与分析 | 第36-38页 |
| ·检测定量引物的可靠性 | 第36-37页 |
| ·组织表达分析 | 第37-38页 |
| ·讨论 | 第38页 |
| ·关于定量引物的设计 | 第38页 |
| ·关于TIP47 基因的组织表达 | 第38页 |
| ·小结 | 第38-39页 |
| 第四章 TIP47 基因的RNA 干扰研究 | 第39-55页 |
| ·材料与方法 | 第39-43页 |
| ·主要仪器设备 | 第39页 |
| ·主要试验材料 | 第39页 |
| ·靶向TIP47 基因的shRNA 干扰序列的设计与合成 | 第39-40页 |
| ·pENTR/CMV-GFP/U6-shRNA 载体构建 | 第40页 |
| ·pDsRed1-C1-TIP47 表达载体的构建 | 第40-41页 |
| ·shRNA 有效序列的筛选 | 第41页 |
| ·构建重组腺病毒载体并鉴定 | 第41-42页 |
| ·包装、扩繁腺病毒并测定滴度 | 第42-43页 |
| ·腺病毒感染乳腺上皮细胞最佳MOI 的测定 | 第43页 |
| ·TIP47 基因的RNA 干扰效率检测 | 第43页 |
| ·PT-qPCR 检测TIP47 基因干扰后对乳腺上皮细胞脂质代谢相关基因的影响 | 第43页 |
| ·结果与分析 | 第43-51页 |
| ·pENTR/CMV-GFP/U6-shRNA 载体的构建 | 第43-44页 |
| ·pDsRed1-C1-TIP47 载体的构建 | 第44-45页 |
| ·shRNA 序列的筛选 | 第45-46页 |
| ·构建重组腺病毒载体并进行鉴定 | 第46-47页 |
| ·腺病毒的包装、扩繁及滴度测定 | 第47-48页 |
| ·确定最佳感染复数MOI（Multiplicity Of Infection） | 第48-49页 |
| ·TIP47 基因RNA 干扰效率的检测 | 第49-50页 |
| ·TIP47 的RNAi 对其他一些与脂质代谢相关基因的影响 | 第50-51页 |
| ·讨论 | 第51-54页 |
| ·关于试验技术的优化 | 第51-54页 |
| ·关于TIP47 表达抑制后对脂质代谢相关基因的影响 | 第54页 |
| ·小结 | 第54-55页 |
| 第五章 油酸对西农萨能羊乳腺上皮细胞中脂滴形成和TIP47 基因表达的影响 | 第55-63页 |
| ·材料仪器 | 第55页 |
| ·试验材料及试剂 | 第55页 |
| ·主要仪器 | 第55页 |
| ·试验方法 | 第55-57页 |
| ·溶液配制 | 第55-56页 |
| ·油酸处理乳腺上皮细胞 | 第56页 |
| ·油酸处理乳腺上皮细胞的油红O 染色 | 第56-57页 |
| ·细胞中总RNA 的提取 | 第57页 |
| ·萨能羊乳腺细胞总RNA 第一链cDNA 合成 | 第57页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第57页 |
| ·试验结果 | 第57-60页 |
| ·乳腺上皮细胞油红O 染色 | 第57-58页 |
| ·总RNA 提取结果 | 第58-59页 |
| ·TIP47 的RT-qPCR 检测 | 第59-60页 |
| ·讨论 | 第60-62页 |
| ·关于实验方法及条件的优化 | 第60-61页 |
| ·关于TIP47 基因的调控 | 第61-62页 |
| ·小结 | 第62-63页 |
| 第六章 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 附录 | 第70-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 作者简介 | 第78页 |
