| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 缩写词表 | 第11-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-28页 |
| 1 肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae) | 第14-24页 |
| ·该疾病的感染情况 | 第14页 |
| ·致病因子 | 第14-15页 |
| ·荚膜结构、功能、合成途径等 | 第15-23页 |
| ·荚膜多糖结构、功能 | 第15-16页 |
| ·荚膜多糖的生物合成途径 | 第16-23页 |
| ·细菌多糖合成途径 | 第16-19页 |
| ·WZY依赖途径的肺炎链球菌荚膜的生物合成基因研究 | 第19-21页 |
| ·肺炎链球菌荚膜的前体生物合成途径 | 第21-23页 |
| ·治疗方案及疫苗研究现状 | 第23-24页 |
| 2 葡萄糖-1-磷酸(Glucose-1-phosphate,Glc-1-p)合成现状 | 第24-27页 |
| 3 论文的目的和意义 | 第27-28页 |
| 第二章 半乳糖激酶(Galactokinase,GalK)的生物化学分析及底物特异性研究 | 第28-62页 |
| 1 导言:本实验的目的、意义及创新点 | 第28-30页 |
| 2 材料与方法 | 第30-40页 |
| ·材料 | 第30-31页 |
| ·方法 | 第31-40页 |
| ·半乳糖激酶(Galactokinase,GalK)的克隆 | 第31-34页 |
| ·半乳糖激酶(Galactokinase,GalK)的表达和纯化 | 第34-36页 |
| ·半乳糖激酶(Galactokinase,GalK)的活性测定 | 第36-37页 |
| ·半乳糖激酶(Galactokinase,GalK)的生物化学与动力学分析 | 第37-38页 |
| ·半乳糖激酶(Galactokinase,GalK)的底物特异性研究及检测方法 | 第38-39页 |
| ·葡萄糖-1-磷酸(Glucose-1-phosphate,Glc-1-p)的大量合成及纯化 | 第39-40页 |
| ·CD分析GalK野生型及突变176423二级结构 | 第40页 |
| 3 结果 | 第40-59页 |
| ·半乳糖激酶(Galactokinase,GalK)基因的PCR扩增 | 第40-41页 |
| ·半乳糖激酶(Galactokinase,GalK)基因克隆到pMCSG载体 | 第41-42页 |
| ·半乳糖激酶(Galactokinase,GalK)的试表达 | 第42-43页 |
| ·半乳糖激酶(Galactokinase,GalK)的表达纯化 | 第43-44页 |
| ·半乳糖激酶(Galactokinase,GalK)的活性检测 | 第44-46页 |
| ·半乳糖激酶(Galactokinase,GalK)的生物化学性质分析与酶动力学分析 | 第46-48页 |
| ·半乳糖激酶(Galactokinase,GalK)野生型及突变体的底物特异性研究 | 第48-57页 |
| ·半乳糖激酶(Galactokinase,GalK)野生型及突变体对不同单糖的底物特异性 | 第48-50页 |
| ·半乳糖激酶(Galactokinase,GalK)野生型及突变体对N-乙酰葡萄糖胺(N-acetylglucosamin,GlcNAc)的底物特异性 | 第50页 |
| ·半乳糖激酶(Galactokinase,GalK)野生型及突变体对N-乙酰半乳糖胺(N-acetylgalactosamin,GalNAc)的底物特异性 | 第50-52页 |
| ·基质辅助激光解吸附电离串联飞行时间质谱仪(MALDI-TOF)检测N-乙酰半乳糖胺-1-磷酸(N-acetylgalactosamine-1-phosphate,GalNAc-1-P) | 第52-54页 |
| ·半乳糖激酶(Galactokinase,GalK)野生型及突变体176、1764、17642和176423 对L-糖的底物特异性 | 第54-55页 |
| ·半乳糖激酶(Galactokinase,GalK)野生型及突变体对磷酸基供体的底物特异性 | 第55-57页 |
| ·半乳糖激酶(Galactokinase,GalK)野生型对不同磷酸基供体的底物特异性DNS结果 | 第55-56页 |
| ·半乳糖激酶(Galactokinase,GalK)野生型及突变体176,1764,17642,176423对CTP的底物特异性 | 第56-57页 |
| ·葡萄糖-1-磷酸(Glucose-1-phosphate,Glc-1-P)的纯化 | 第57-58页 |
| ·薄层层析检测纯化产物 | 第57页 |
| ·电喷雾质谱(ESI-MS)鉴定葡萄糖-1-磷酸(Glucose-1-phospha-,Glc-1-P) | 第57-58页 |
| ·CD分析Gal K野生型及突变176423二级结构 | 第58-59页 |
| 4 讨论 | 第59-62页 |
| 第三章 半乳糖异构酶(UDP-galactose 4-epimerase,GalE)的生物化学分析及底物特异性研究 | 第62-92页 |
| 1 导言:本实验的目的、意义及创新点 | 第62-64页 |
| 2 材料与方法 | 第64-66页 |
| ·材料 | 第64-65页 |
| ·菌株和载体 | 第64页 |
| ·酶、试剂和耗材 | 第64页 |
| ·培养基与缓冲液 | 第64页 |
| ·引物 | 第64-65页 |
| ·主要仪器 | 第65页 |
| ·方法 | 第65-66页 |
| ·半乳糖异构酶(UDP-galactose 4-epimerase,GalE)的克隆(同第二章2.2.1) | 第65页 |
| ·半乳糖异构酶(UDP-galactose 4-epimerase,GalE)的表达和纯化(同第二章2.2.2) | 第65页 |
| ·半乳糖异构酶(UDP-galactose 4-epimerase,GalE)的酶活的毛细管电泳检测及底物特异性分析 | 第65-66页 |
| 3 结果 | 第66-89页 |
| ·半乳糖异构酶(UDP-galactose 4-epimerase,GalE)基因的PCR扩增 | 第66-67页 |
| ·半乳糖异构酶(UDP-galactose 4-epimerase,GalE)基因克隆到pMCSG载体 | 第67-68页 |
| ·半乳糖异构酶(UDP-galactose 4-epimerase,GalE)的试表达 | 第68-69页 |
| ·半乳糖异构酶(UDP-galactose 4-epimerase,GalE)的表达纯化 | 第69-70页 |
| ·半乳糖异构酶(UDP-galactose 4-epimerase,GalE)的活性检测 | 第70页 |
| ·半乳糖异构酶(UDP-galactose 4-epimerase,GalE)的生物化学与酶学性质分析 | 第70-89页 |
| ·GalE1和GalE2的底物特异性 | 第70-78页 |
| 1) 底物UDP-Gal | 第70-72页 |
| 2) UDP-GalNAc | 第72-74页 |
| 3) UDP-GlC | 第74-76页 |
| 4) UDP-GlcNAc | 第76-78页 |
| ·GalE2突变的底物特异性 | 第78-86页 |
| 1) 底物UDP-Gal | 第78-80页 |
| 2) UDP-GalNAc | 第80-82页 |
| 3) UDP-Glc | 第82-84页 |
| 4) UDP-GlcNAc | 第84-86页 |
| ·GalE2最适温度 | 第86-89页 |
| 4 讨论 | 第89-92页 |
| 附录Ⅰ | 第92-100页 |
| 附录Ⅱ | 第100-105页 |
| 参考文献 | 第105-109页 |
| 致谢 | 第109页 |
