| 目录 | 第1-6页 |
| 中文摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 综述 | 第8-16页 |
| 前言 | 第16-28页 |
| 1 表皮生长因子(EGFR) | 第16-19页 |
| ·EGFR的结构特性 | 第17-18页 |
| ·EGFR的研究意义 | 第18-19页 |
| 2 Fms样酪氨酸激酶(FLT3) | 第19-21页 |
| ·FLT的结构 | 第19-20页 |
| ·FLT的功能 | 第20页 |
| ·FLT研究意义 | 第20-21页 |
| 3 毕赤酵母表达系统 | 第21-28页 |
| ·毕赤酵母表达系统的特点 | 第22-23页 |
| ·毕赤酵母及表达载体 | 第23-26页 |
| ·毕赤酵母诱导表达的调控机制 | 第26-28页 |
| 实验材料 | 第28-32页 |
| 1 菌株和质粒 | 第28页 |
| 2 试剂 | 第28-30页 |
| 3 PCR反应试剂及酶 | 第30-31页 |
| 4 仪器和设备 | 第31-32页 |
| 实验方法 | 第32-42页 |
| 1 克隆质粒的构建 | 第32-36页 |
| ·引物的设计 | 第32-33页 |
| ·基因片段的扩增 | 第33页 |
| ·质粒的提取 | 第33-34页 |
| ·双酶切和连接 | 第34-35页 |
| ·转化大肠杆菌 | 第35-36页 |
| ·阳性重组子的筛选与鉴定 | 第36页 |
| 2 表达质粒的构建 | 第36页 |
| 3 毕赤酵母中表达重组蛋白质 | 第36-42页 |
| ·制备pPICZαA-EGFR和pPICZαA-FLT | 第36-37页 |
| ·酵母感受态的制备 | 第37页 |
| ·电击转化 | 第37-38页 |
| ·菌落PCR鉴定 | 第38页 |
| ·筛选高拷贝菌株 | 第38页 |
| ·蛋白质的诱导表达 | 第38-39页 |
| ·用SDS-PAGE鉴定重组蛋白的表达 | 第39-41页 |
| ·蛋白质的初步纯化 | 第41页 |
| ·蛋白质的亲和纯化 | 第41-42页 |
| 结果与分析 | 第42-54页 |
| 1 基因片段的扩增 | 第42页 |
| 2 pBSSK-EGFR和pBSSK-FLT的构建 | 第42-44页 |
| ·pBSSK-EGFR的双酶切鉴定 | 第42-43页 |
| ·pBSSK-FLT的双酶切鉴定 | 第43-44页 |
| 3 构建pPICZαA-EGFR和pPICZαA-FLT | 第44-46页 |
| ·pPICZαA-EGFR双酶切鉴定 | 第44页 |
| ·pPICZαA-FLT的双酶切鉴定 | 第44-45页 |
| ·pPICZαA-EGFR和pPICZαA-FLT的测序分析结果 | 第45-46页 |
| 4 酵母菌落PCR鉴定 | 第46-47页 |
| 5 pPICZαA-EGFR/X33和pPICZαA-FLT/X33的诱导表达 | 第47-54页 |
| ·筛选pPICZαA-EGFR/X33高表达的菌株 | 第47-48页 |
| ·筛选pPICZαA-FLT/X33高表达的菌株 | 第48-49页 |
| ·pPICZαA-EGFR/X33不同时间的诱导表达 | 第49页 |
| ·pPICZαA-FLT/X33不同时间的诱导表达情况 | 第49-50页 |
| ·pPICZαA-EGFR/X33在含有磷酸钾缓冲液和不含缓冲液的表达 | 第50-51页 |
| ·pPICZαA-FLT/X33在含有磷酸钾缓冲液和不含缓冲液的表达 | 第51页 |
| ·pPICZαA-EGFR/X33在不同甲醇浓度下,蛋白质的诱导表达 | 第51-52页 |
| ·pPICZαA-FLT/X33在不同甲醇浓度下,蛋白质的诱导表达 | 第52页 |
| ·pPICZαA-EGFR/X33的亲和纯化 | 第52页 |
| ·pPICZαA-FLT/X33的亲和纯化 | 第52-54页 |
| 讨论 | 第54-57页 |
| 1 表达质粒的构建 | 第54-55页 |
| 2 菌落PCR | 第55页 |
| 3 诱导表达情况 | 第55-57页 |
| 总结与展望 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-62页 |
| 论文发表 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
