| 中文摘要 | 第1-6页 |
| 英文摘要 | 第6-8页 |
| 1、引言 | 第8-9页 |
| 2、材料、仪器和试剂 | 第9-12页 |
| 3、方法 | 第12-23页 |
| ·PCLⅡ基因片断的克隆 | 第12-13页 |
| ·表达载体的制备 | 第13页 |
| ·大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞的制备 | 第13页 |
| ·表达片断的酶切、连接及克隆 | 第13-15页 |
| ·表达产物菌落Western检测 | 第15页 |
| ·转化子的鉴定 | 第15-16页 |
| ·PCLⅡ的诱导表达和SDS-PAGE分析 | 第16页 |
| ·PCLⅡ表达条件的优化和小规模发酵 | 第16-17页 |
| ·表达条件的优化 | 第16页 |
| ·小规模发酵 | 第16-17页 |
| ·表达产物的纯化 | 第17-18页 |
| ·收集菌体蛋白 | 第17页 |
| ·PCLⅡ融合蛋白的纯化 | 第17页 |
| ·PCLⅡ融合蛋白肠激酶酶切及酶切样品纯化 | 第17页 |
| ·CM-Sepharose FF阳离子交换柱层析纯化PCLⅡ | 第17-18页 |
| ·PCLⅡ纯化样品的脱盐 | 第18页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第18页 |
| ·脱盐样品的纯度检测 | 第18页 |
| ·抗体的制备、纯化与检测 | 第18-20页 |
| ·抗体的制备与纯化 | 第18-19页 |
| ·抗体的检测 | 第19-20页 |
| ·重组PCLⅡ的Western印迹分析 | 第20页 |
| ·性质检测 | 第20-23页 |
| ·凝血活性的检测 | 第20页 |
| ·糖抑制试验 | 第20页 |
| ·耐热性测定 | 第20-21页 |
| ·耐酸碱测定 | 第21页 |
| ·促T-淋巴细胞的有丝分裂活性的测定 | 第21页 |
| ·抗人类单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV—Ⅱ)活性的测定 | 第21-23页 |
| 4 结果与分析 | 第23-43页 |
| ·PCLⅡ表达载体的构建 | 第23-24页 |
| ·PCLⅡ表达质粒的筛选和检测 | 第24-26页 |
| ·菌落的Western检测 | 第24-25页 |
| ·基因片段的菌落PCR和酶切电泳检测 | 第25-26页 |
| ·PCLⅡ的诱导表达 | 第26-29页 |
| ·PCLⅡ表达产物的SDS-PAGE检测 | 第26-27页 |
| ·PCLⅡ表达条件的优化 | 第27-29页 |
| ·PCLⅡ小规模发酵 | 第29页 |
| ·PCLⅡ基因表达产物的纯化 | 第29-30页 |
| ·抗体的制备与检测 | 第30-33页 |
| ·抗血清的滴度测定 | 第31-32页 |
| ·Western Blot法鉴定抗血清的特异性 | 第32-33页 |
| ·PCLⅡ纯化重组蛋白的Western Blot分析 | 第33页 |
| ·PCLⅡ纯化重组蛋白的活性检测 | 第33-43页 |
| ·凝血活性检测 | 第33-34页 |
| ·糖抑制试验结果 | 第34-35页 |
| ·温度和pH值对重组PCLⅡ凝集活性的影响 | 第35-37页 |
| ·重组PCLⅡ促T淋巴细胞有丝分裂活性的测定 | 第37页 |
| ·抗HSV-Ⅱ病毒实验结果 | 第37-43页 |
| 5.讨论 | 第43-49页 |
| ·蛋白质表达体系的选择 | 第43-44页 |
| ·外源蛋白在大肠杆菌中表达的优化 | 第44-46页 |
| ·黄精凝集素(PCLⅡ)的体外表达 | 第46-49页 |
| ·黄精凝集素(PCLⅡ)基因与大肠杆菌密码子使用频率的比较 | 第46-48页 |
| ·PCLⅡ mRNA的结构预测和TIR分析 | 第48-49页 |
| ·pET32a(+)表达载体 | 第49页 |
| 6.结论 | 第49-51页 |
| 参考文献 | 第51-55页 |
| 文献综述 | 第55-85页 |
| 一、植物凝集素的定义 | 第55-56页 |
| 二、植物凝集素的分类 | 第56-58页 |
| 三、植物凝集素的生理功能 | 第58页 |
| 四、植物凝集素在生物学和医学研究中的应用 | 第58-67页 |
| 五、外源基因在大肠杆菌中克隆表达 | 第67-74页 |
| 六、植物凝集素基因在大肠杆菌中克隆表达 | 第74-77页 |
| 综述参考文献 | 第77-85页 |
| 研究生期间发表的论文 | 第85-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
