| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-33页 |
| 1 能源现状 | 第11-12页 |
| ·世界及中国能源消费现状和趋势 | 第11页 |
| ·世界可再生能源发展趋势 | 第11-12页 |
| 2 利用木质纤维素发酵生产乙醇的研究背景及意义 | 第12-13页 |
| 3 木质纤维素 | 第13-17页 |
| ·木质纤维素类物质的分布和组成 | 第13-15页 |
| ·木质纤维素类物质水解方法 | 第15-16页 |
| ·水解副产物的生成 | 第16-17页 |
| 4 利用木糖微生物 | 第17-19页 |
| ·微生物发酵木糖生产酒精的代谢机理 | 第17-18页 |
| ·可以发酵木糖产乙醇的微生物 | 第18-19页 |
| 5 发酵木糖产乙醇的重组酿酒酵母菌的构建工程 | 第19-28页 |
| ·木糖的转运 | 第19-20页 |
| ·引入木糖还原酶和木糖醇脱氢酶的代谢途径 | 第20-25页 |
| ·引入木糖异构酶基因的代谢途径 | 第25-26页 |
| ·耐毒酿酒酵母的选育 | 第26-28页 |
| 6 重组酿酒酵母的转化方法 | 第28-29页 |
| 7 不相容性双质粒共转化重组菌的构建 | 第29页 |
| 8 展望 | 第29-30页 |
| 9 本实验研究内容 | 第30-33页 |
| 第二章 材料与试剂 | 第33-37页 |
| 1 实验材料 | 第33页 |
| 2 试剂盒 | 第33页 |
| 3 培养基 | 第33-35页 |
| 4 酶、抗生素及试剂 | 第35页 |
| 5 溶液配制 | 第35-36页 |
| 6 主要实验仪器 | 第36-37页 |
| 第三章 方法与步骤 | 第37-49页 |
| 1 Candida Shehatae木糖还原酶基因xyl1在Saccharomyces cerevisiae YS58中的表达 | 第37-40页 |
| ·带C.Shehatae木糖还原酶基因xyl1的表达载体pACT2-xyl1导入酿酒酵母 | 第37-38页 |
| ·木糖还原酶活性的测定 | 第38-40页 |
| ·带木糖还原酶基因xyl1的重组酵母的发酵试验 | 第40页 |
| 2 重组质粒载体pDR195-xyl2的构建及酿酒酵母木糖醇脱氢酶基因的超表达 | 第40-46页 |
| ·酿酒酵母木糖醇脱氢酶基因xyl2的获得 | 第40-42页 |
| ·重组酵母载体pDR195-xyl2的构建 | 第42-45页 |
| ·重组载体pDR195-xyl2导入酿酒酵母YS58 | 第45页 |
| ·阳性重组子的筛选 | 第45页 |
| ·木糖醇脱氢酶活性测定 | 第45-46页 |
| 3 带有xyl1和xyl2的重组酿酒酵母的构建 | 第46-47页 |
| ·YS58-x1感受态细胞的制备 | 第46页 |
| ·xyl1和xyl2的重组酿酒酵母的构建 | 第46页 |
| ·带不相容性双质粒重组菌的稳定性研究 | 第46-47页 |
| ·双酶重组菌的酶活 | 第47页 |
| 4 重组菌株YS58-x1-x2的发酵实验 | 第47页 |
| ·菌种的增殖 | 第47页 |
| ·3%葡萄糖+2%木糖发酵实验 | 第47页 |
| 5 糖和乙醇分析方法 | 第47-49页 |
| ·高效液相分析糖浓度 | 第47-48页 |
| ·气相色谱分析乙醇浓度 | 第48-49页 |
| 第四章 结果与讨论 | 第49-63页 |
| 1 Candida Shehatae木糖还原酶基因xyl1在Saccharomyces cerevisiae YS58中的表达 | 第49-52页 |
| ·重组表达载体pACT2-xyl1导入S.cerevisiae YS58及重组子的筛选 | 第49页 |
| ·重组子酶活测定 | 第49-51页 |
| ·木糖醇发酵实验 | 第51-52页 |
| 2 Saccharomyces cerevisiae TMB3000的木糖醇脱氢酶基因xyl2在Saccharomyces cerevisiae YS58中的表达 | 第52-55页 |
| ·Saccharomyces cerevisiae木糖醇脱氢酶基因xyl2的克隆 | 第52-53页 |
| ·重组酵母表达载体pDR195-xyl2的构建 | 第53-54页 |
| ·重组表达载体pDR195-xyl2导入S.cerevisiae YS58 | 第54页 |
| ·木糖醇脱氢酶活性测定 | 第54-55页 |
| 3 带木糖还原酶基因xyl1和木糖醇脱氢酶基因xyl2的重组酵母YS58-x1-x2的构建 | 第55-60页 |
| ·重组子筛选 | 第55-56页 |
| ·带不相容性双质粒重组菌的稳定性研究 | 第56-57页 |
| ·重组子双酶活测定 | 第57页 |
| ·重组菌葡萄糖木糖共底物发酵实验 | 第57-60页 |
| 4 讨论 | 第60-63页 |
| 第五章 结论 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-73页 |
| 附录 | 第73-75页 |
| 本文缩写词表 | 第73-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
