| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-34页 |
| 第一节 双生病毒的研究进展 | 第12-20页 |
| 1 双生病毒的分类与寄主范围 | 第12-14页 |
| ·玉米线条病毒属(Mastrevirus) | 第12-13页 |
| ·甜菜曲顶病毒属(Curtovirus) | 第13页 |
| ·番茄伪曲顶病毒属(Topocuvirus) | 第13页 |
| ·菜豆金色花叶病毒属(Begomovirus) | 第13-14页 |
| 2 双生病毒的基因组结构及功能 | 第14-17页 |
| ·玉米线条病毒属(Mastrevirus) | 第14-15页 |
| ·甜菜曲顶病毒属(Curtovirus)和番茄伪曲顶病毒属(Topocuvirus) | 第15页 |
| ·菜豆金色花叶病毒属(Begomovirus) | 第15-17页 |
| 3 DNAβ的发现和它在双生病毒致病性中的作用 | 第17-19页 |
| ·DNAβ的发现及其特征 | 第17-18页 |
| ·DNAβ在双生病毒致病性中的作用 | 第18页 |
| ·DNAβ卫星分子编码的βC1蛋白 | 第18-19页 |
| 4 展望 | 第19-20页 |
| 第二节 病毒编码的RNA沉默抑制子 | 第20-33页 |
| 1 RNA沉默简介 | 第20-22页 |
| 2 RNA沉默抑制子的发现及其鉴定方法 | 第22-27页 |
| ·RNA沉默抑制子的发现和已鉴定的沉默抑制子 | 第22-25页 |
| ·沉默抑制子的鉴定方法 | 第25-27页 |
| 3 沉默抑制子的作用机理 | 第27-30页 |
| ·FHV的B2抑制siRNA的产生 | 第27页 |
| ·番茄丛矮病毒属的P19阻碍siRNA整合入RISC | 第27-28页 |
| ·马铃薯Y病毒属的HC-Pro干扰RISC的形成 | 第28-29页 |
| ·CMV 2b干扰沉默信号的短距离或长距离移动 | 第29-30页 |
| 4 沉默抑制子的应用 | 第30-31页 |
| ·解析RNA沉默的途径 | 第30-31页 |
| ·增强外源蛋白的表达 | 第31页 |
| 5 存在的问题与展望 | 第31-33页 |
| 第三节 本研究的目的和意义 | 第33-34页 |
| 第二章 中国番茄黄化曲叶病毒的卫星DNAβ编码的RNA沉默抑制子βC1的作用机理研究 | 第34-50页 |
| 1 材料与方法 | 第35-41页 |
| ·材料 | 第35页 |
| ·载体构建 | 第35页 |
| ·农杆菌共浸润接种(Agroinfiltration) | 第35-36页 |
| ·信号传导浸润方法 | 第36页 |
| ·GFP荧光观察和拍照 | 第36页 |
| ·大量提取RNA和Northern印迹分析 | 第36-39页 |
| ·植物可溶性蛋白样品的制备 | 第39页 |
| ·重组蛋白在自然条件下的大量纯化 | 第39-40页 |
| ·蛋白质含量测定(Bio-Rad protein Assay) | 第40页 |
| ·GFP RNA的体外转录与探针标记 | 第40-41页 |
| ·siRNA探针标记与纯化 | 第41页 |
| ·电泳迁移率变动试验(EMSA) | 第41页 |
| 2 结果与分析 | 第41-48页 |
| ·βC1基因的克隆和植物表达载体的构建 | 第41-42页 |
| ·农杆菌瞬时表达沉默诱导体系的建立 | 第42-43页 |
| ·TYLCCNV Y10伴随的卫星DNAβ编码的βC1蛋白抑制GFP 16c本氏烟的局部沉默 | 第43-45页 |
| ·TYLCCNV Y10伴随的卫星DNAβ编码的βC1蛋白可以抑制系统沉默 | 第45-46页 |
| ·TYLCCNV Y10伴随的卫星DNAβ编码的βC1蛋白对GFP沉默信号传导的影响 | 第46-47页 |
| ·TYLCCNV Y10伴随的卫星DNAβ编码的βC1蛋白与siRNA的结合特性分析 | 第47-48页 |
| ·TYLCCNV Y10伴随的卫星DNAβ编码的βC1蛋白与GFP RNA的结合特性分析 | 第48页 |
| 3 讨论 | 第48-50页 |
| 第三章 中国番茄黄化曲叶病毒编码的RNA沉默抑制子AC2和AC4的作用机理研究 | 第50-62页 |
| 第一节 中国番茄黄化曲叶病毒编码的抑制子基因AC2和AC4在大肠杆菌中的表达 | 第51-56页 |
| 1 材料与方法 | 第51-53页 |
| ·菌株、质粒和试剂 | 第51页 |
| ·AC2和AC4基因的克隆和原核表达载体构建 | 第51页 |
| ·诱导表达 | 第51-52页 |
| ·Western blotting鉴定 | 第52页 |
| ·表达产物在变性条件下的纯化 | 第52-53页 |
| 2 结果与分析 | 第53-55页 |
| ·AC2和AC4基因的克隆和原核表达载体构建 | 第53-54页 |
| ·AC2和AC4基因在大肠杆菌中的表达 | 第54-55页 |
| 3 讨论 | 第55-56页 |
| 第二节 中国番茄黄化曲叶病毒编码的RNA沉默抑制子AC2和AC4的作用机理研究 | 第56-62页 |
| 1 材料与方法 | 第56页 |
| ·载体构建 | 第56页 |
| ·其它 | 第56页 |
| 2 结果与分析 | 第56-61页 |
| ·AC2和AC4基因的克隆和植物表达载体的构建 | 第56-57页 |
| ·TYLCCNV Y10编码的AC2和AC4抑制GFP 16c本氏烟的局部沉默 | 第57-58页 |
| ·AC2蛋白与siRNA的结合特性分析 | 第58-59页 |
| ·AC2蛋白与GFP RNA的结合特性分析 | 第59-60页 |
| ·AC4蛋白与siRNA的结合特性分析 | 第60页 |
| ·AC4蛋白与GFP RNA的结合特性分析 | 第60-61页 |
| 3 讨论 | 第61-62页 |
| 全文小结 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 附录1 本论文中所用术语缩写与中英文对照 | 第70-71页 |
| 附录2 硕士期间已接收和正在投稿的文章 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
