| 中文摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-16页 |
| 第一章 前言 | 第16-34页 |
| 第一节 腺病毒简介 | 第16-19页 |
| 一、 腺病毒结构和基因组 | 第16-17页 |
| 二、 腺病毒感染 | 第17页 |
| 三、 腺病毒分型检测 | 第17-19页 |
| 1、免疫学分型方法 | 第17-18页 |
| 2、分子生物学分型方法 | 第18-19页 |
| 第二节 腺病毒载体应用概况 | 第19-24页 |
| 一、 腺病毒载体简介 | 第19-20页 |
| 二、 腺病毒疫苗载体 | 第20-24页 |
| 1. 腺病毒疫苗载体的特点 | 第20-22页 |
| 2. 腺病毒载体面临的问题 | 第22-24页 |
| 第三节 腺病毒流行病学研究 | 第24-27页 |
| 一、 研究概况 | 第24-26页 |
| 二、 国际流行病学 | 第26页 |
| 三、 中国流行病学 | 第26-27页 |
| 第四节 腺病毒结构蛋白和关键抗原分析 | 第27-30页 |
| 一、 六邻体（hexon）结构及功能分析 | 第28-29页 |
| 二、 纤维蛋白（fiber）结构及功能分析 | 第29-30页 |
| 三、 五邻体（penton）结构及功能分析 | 第30页 |
| 第五节 论文设计 | 第30-34页 |
| 一、 设计思路 | 第30-32页 |
| 二、 论文目的 | 第32页 |
| 三、 实验设计 | 第32-34页 |
| 第二章 中国地区 Ad5 等血清型腺病毒流行病学研究 | 第34-54页 |
| 第一节 中国地区 Ad5 的流行病学研究 | 第34-42页 |
| 一、 材料、试剂和仪器 | 第34-35页 |
| 1. 细胞、病毒和血清 | 第34页 |
| 2. 主要材料和试剂 | 第34页 |
| 3. 主要仪器与设备 | 第34-35页 |
| 二、 实验方法 | 第35-36页 |
| 1. rAd5-Luc 的构建 | 第35页 |
| 2. 血清的收集和保存 | 第35页 |
| 3. 病毒中和试验 | 第35-36页 |
| 三、 结果 | 第36-41页 |
| 1. 中国地区健康成人的 Ad5 血清阳性率 | 第36-39页 |
| 2. 东北地区儿童 Ad2 和 Ad5 的血清阳性率 | 第39-41页 |
| 四、 讨论 | 第41-42页 |
| 第二节 分型检测腺病毒中和抗体新方法的建立和稀有血清型腺病毒流行病学研究 | 第42-54页 |
| 一、 材料、试剂和仪器 | 第42-46页 |
| 1. 实验动物 | 第42页 |
| 2. 细胞、病毒和血清 | 第42页 |
| 3. 质粒和菌株 | 第42页 |
| 4. 常用酶及试剂盒 | 第42-43页 |
| 5. 主要试剂 | 第43页 |
| 6. 主要缓冲液 | 第43-45页 |
| 7. 主要仪器与设备 | 第45-46页 |
| 二、 实验方法 | 第46-48页 |
| 1. 表达腺病毒 Knob 蛋白原核表达载体的构建 | 第46页 |
| 2. Knob 蛋白的诱导表达 | 第46页 |
| 3. Knob 蛋白的纯化 | 第46-47页 |
| 4. Knob 蛋白兔多克隆血清的制备 | 第47页 |
| 5. 不同血清型 Knob 蛋白与兔多克隆血清的交互反应 | 第47页 |
| 6. Knob 抗原 ELISA 检测人血清中腺病毒抗体 | 第47页 |
| 7. 小鼠免疫 | 第47-48页 |
| 三、 结果 | 第48-52页 |
| 1. 血清中 Ad5 衣壳蛋白特异性抗体分析 | 第48-49页 |
| 2. 不同血清型腺病毒 Knob 蛋白的表达和纯化 | 第49-50页 |
| 3. 不同血清型腺病毒 Knob 蛋白与兔血清、人血清间的交互反应 | 第50-51页 |
| 4. Knob 抗原 ELISA 检测人血清中的腺病毒中和抗体 | 第51-52页 |
| 四、 讨论 | 第52-53页 |
| 五、 小结 | 第53-54页 |
| 第三章 腺病毒中和抗原表位分析 | 第54-70页 |
| 第一节 Ad5 体液免疫反应性质分析 | 第54-60页 |
| 一、 材料、试剂和仪器 | 第54页 |
| 1. 质粒和菌株 | 第54页 |
| 2. 试剂和缓冲液 | 第54页 |
| 二、 实验方法 | 第54-56页 |
| 1. 五型腺病毒 HVR 原核表达载体的构建 | 第54页 |
| 2. 蛋白的原核表达 | 第54页 |
| 3. HVR 蛋白的纯化与分析 | 第54-55页 |
| 4. Western blotting 免疫分析 | 第55页 |
| 5. 蛋白阻断的病毒中和试验 | 第55-56页 |
| 三、 结果 | 第56-59页 |
| 1. 5 型腺病毒 HVR 原核表达载体的构建 | 第56页 |
| 2. Ad5 HVR 蛋白的表达和纯化 | 第56-58页 |
| 3. Ad5 衣壳蛋白特异的体液免疫反应分析 | 第58-59页 |
| 四、 讨论 | 第59-60页 |
| 第二节 Ad5 六邻体中和抗原表位分析 | 第60-70页 |
| 一、 实验材料、试剂和仪器 | 第60页 |
| 1. 主要试剂 | 第60页 |
| 2. 主要缓冲液 | 第60页 |
| 3. 主要仪器与设备 | 第60页 |
| 二、 实验方法 | 第60-62页 |
| 1. 高效液相色谱仪操作方法 | 第60-61页 |
| 2. 圆二色性检测方法 | 第61页 |
| 3. 红外光谱检测方法 | 第61页 |
| 4. Viscotek GPC/SEC 系统检测蛋白分子量 | 第61-62页 |
| 5. His Pull-down 试验 | 第62页 |
| 三、 结果 | 第62-68页 |
| 1. 嵌合 HVR 蛋白的表达和纯化 | 第62-64页 |
| 2. 嵌合 HVR 蛋白抗原特异性分析 | 第64-65页 |
| 3. 嵌合 HVR 蛋白与 FX 亲和能力分析 | 第65-66页 |
| 4. HVR 蛋白分子量和结构分析 | 第66-68页 |
| 四、 讨论 | 第68-69页 |
| 五、 小结 | 第69-70页 |
| 第四章 六邻体嵌合型 rAd5 载体构建及体外活性研究 | 第70-86页 |
| 第一节 嵌合型 rAd5 载体的构建 | 第70-79页 |
| 一、 实验材料、试剂和器材 | 第70-72页 |
| 1. 细胞、质粒和菌株 | 第70页 |
| 2. 常用酶及试剂盒 | 第70页 |
| 3. 主要试剂 | 第70-71页 |
| 4. 常规试剂缓冲液 | 第71页 |
| 5. 主要仪器与设备 | 第71-72页 |
| 二、 实验方法 | 第72-74页 |
| 1. 质粒构建 | 第72-74页 |
| 2. 腺病毒重组包装 | 第74页 |
| 三、 结果 | 第74-78页 |
| 1. 嵌合骨架质粒的构建 | 第74-76页 |
| 2. 六邻体嵌合型载体的包装和表达 | 第76-78页 |
| 四、 讨论 | 第78-79页 |
| 第二节 嵌合型 rAd5 载体的体外活性研究 | 第79-86页 |
| 一、 实验材料、试剂和器材 | 第79页 |
| 1. 细胞、质粒和菌株 | 第79页 |
| 2. 主要试剂 | 第79页 |
| 二、 实验方法 | 第79-81页 |
| 1. 嵌合质粒包装效率比较 | 第79页 |
| 2. 病毒噬斑筛选 | 第79-80页 |
| 3. 重组腺病毒的扩增 | 第80页 |
| 4. 重组腺病毒的纯化 | 第80页 |
| 5. 重组腺病毒的滴度测定 | 第80-81页 |
| 三、 结果 | 第81-84页 |
| 1. 嵌合质粒包装效率对比 | 第81-83页 |
| 2. 嵌合型 rAd5 载体转基因表达水平检测 | 第83-84页 |
| 3. 嵌合型 rAd5 载体传代稳定性检测 | 第84页 |
| 四、 讨论 | 第84-85页 |
| 五、 小结 | 第85-86页 |
| 第五章 六邻体嵌合型 rAd5 载体在小鼠体内免疫原性研究 | 第86-98页 |
| 第一节 嵌合载体免疫原性研究 | 第86-92页 |
| 一、 实验材料、试剂和器材 | 第86页 |
| 1. 实验动物 | 第86页 |
| 2. 主要试剂、药品 | 第86页 |
| 二、 实验方法 | 第86-89页 |
| 1. 小鼠免疫 | 第86页 |
| 2. 细胞免疫检测（ELISPOT） | 第86-88页 |
| 3. Luminex 多细胞因子检测 | 第88页 |
| 4. HIV-1 Gag 抗体检测 | 第88-89页 |
| 三、 结果 | 第89-91页 |
| 1. 表达 HIV-1 Gag 基因病毒载体的构建和表达 | 第89页 |
| 2. Gag 特异的免疫反应分析 | 第89-90页 |
| 3. Ad5 特异的免疫反应分析 | 第90页 |
| 4. Gag 和 Ad5 特异的 Th1 和 Th2 型细胞因子反应分析 | 第90-91页 |
| 四、 讨论 | 第91-92页 |
| 第二节 嵌合载体逃避预存免疫能力研究 | 第92-98页 |
| 一、 实验方法 | 第92-93页 |
| 1. 动物免疫 | 第92-93页 |
| 二、 结果 | 第93-95页 |
| 1. 嵌合载体逃避中度水平预存免疫能力分析 | 第93页 |
| 2. 嵌合载体逃避高水平预存免疫能力分析 | 第93-94页 |
| 3. 嵌合载体逃避其它血清型腺病毒预存免疫的能力分析 | 第94-95页 |
| 三、 讨论 | 第95-96页 |
| 四、 小结 | 第96-98页 |
| 结论 | 第98-100页 |
| 参考文献 | 第100-106页 |
| 致谢 | 第106页 |
